神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响

• 作 者: 罗振钊 王静 孔曼 胡绘 卢忠心 施静
• 机 构: 华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院检验科,华中科技大学同济医学院基础医学院神经生物学系
• 出 处: 华中科技大学学报(医学版)
• 发表日期: 2015年01期
• 关键词: 小胶质细胞 细胞因子 神经元损伤度 表型

目的探讨不同的神经元损伤度对小胶质细胞表型的影响。方法将原代培养的神经元进行缺氧处理,不同的时长(0.5、1、2、4h)后,复氧处理24h,收集神经元条件培养液(neuron-conditioned media,NCM),然后将NCM刺激原代培养的小胶质细胞24h(NCM∶小胶质细胞培养液=1∶1,V/V)。采用Western blot法检测小胶质细胞内的M2表型标记物精氨酸酶-1(arginase-1)和激活标记物离子钙结合衔接分子-1(Iba-1)的表达变化规律,采用免疫荧光法检测arginase-1的表达变化规律。同时,采用ELISA法检测小胶质细胞培养液上清中的营养因子,如脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和炎性因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的分泌变化规律。最后,将不同损伤度的NCM诱导小胶质细胞形成不同表型,将小胶质细胞和缺氧处理2h后的神经元共培养24h,MTT法检测神经元的活力。结果轻微损伤(缺氧0.5、1h)的NCM明显下调M2型标记物arginase-1的表达水平,中度(缺氧2h)和重度(缺氧4h)损伤的NCM能够上调arginase-1的表达,各种损伤度的NCM都能上调Iba-1的表达水平,提示其在一定程度上激活小胶质细胞。同时,轻微损伤的NCM明显上调小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌,而中度和重度损伤的NCM对这些促炎因子的释放没有影响,各种损伤度的NCM都能明显上调营养因子的分泌。MTT法检测表明,轻微和重度损伤处理的NCM刺激的小胶质细胞进一步加重缺氧处理的神经元损伤,而中度损伤的NCM对缺氧处理后的神经元具有保护作用。结论神经元损伤度是决定小胶质细胞表型的重要因素,进而使小胶质细胞进一步发挥神经毒性或保护作用。