T7噬菌体文库构建中载体制备及连接条件的优化

• 作 者: 葛昆 钟理 赵隆华 王建飞 王海霞
• 机 构: 河北大学生命科学学院生物芯片研究室河北大学生命科学学院生物芯片研究室;CityofHopeNationalMedical,Center,Duarte,California,USA;中国地质大学(河北保
• 出 处: 科技信息（学术版）
• 发表日期: 2008年6期
• 关键词: T7噬菌体DNA DNA提取 酶切 体外包装

目的分离纯化T7噬菌体DNA并构建T7select10-3b载体.方法用酚和氯仿:异戊醇(24:1)提取得到T7噬菌体DNA.用EcoRI和HindIII对T7DNA进行双酶切 ,得到载体的左臂和右臂.最后通过试剂盒从琼脂糖凝胶中回收载体的左右臂,用紫外分光光度计测定其纯度.与外援片段连接后进行体外包装.结果构建得到T7select10-3b载体 ,载体的左右臂大小分别为19kb和16kb,并成功包装成噬菌体颗粒.结论本方法适合大量提取纯化T7DNA和T7select10-3b载体,得到的载体可用于构建cDNA文库等其它基因工程的操作.