【摘 要】
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目的:探究布地奈德通过干预线粒体钙单转运蛋白影响哮喘大鼠气道上皮细胞自噬和屏障功能的机制.方法:30只雄性SD大鼠作为研究对象,并根据实验目的分为3组:对照组(正常大鼠,生理盐水干预,n=10),哮喘组(通过OVA诱导大鼠哮喘模型,n=10),布地奈德组(气雾剂布地奈德用于治疗过敏性哮喘的大鼠,n=10).通过钙测定试剂盒和蛋白印迹分析大鼠气道上皮细胞中Ca2+的吸收和MCU蛋白表达;TEER和TRITC荧光分析检测大鼠气道上皮中的屏障功能;免疫组化分析分气道上皮细胞屏障功能相关因子ZO-1、E-cadh
【机 构】
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西安交通大学附属儿童医院中西医结合科 陕西西安710100;西安国际医学中心医院药学部 陕西西安710100
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目的:探究布地奈德通过干预线粒体钙单转运蛋白影响哮喘大鼠气道上皮细胞自噬和屏障功能的机制.方法:30只雄性SD大鼠作为研究对象,并根据实验目的分为3组:对照组(正常大鼠,生理盐水干预,n=10),哮喘组(通过OVA诱导大鼠哮喘模型,n=10),布地奈德组(气雾剂布地奈德用于治疗过敏性哮喘的大鼠,n=10).通过钙测定试剂盒和蛋白印迹分析大鼠气道上皮细胞中Ca2+的吸收和MCU蛋白表达;TEER和TRITC荧光分析检测大鼠气道上皮中的屏障功能;免疫组化分析分气道上皮细胞屏障功能相关因子ZO-1、E-cadherin的蛋白表达;ELISAF分析BALF上清液中炎性因子IL-4、IL-5和IL-13的水平;二氢乙锭衍生物和蛋白印迹分析BALF中ROS含量和caspase-3活性.结果:哮喘组较对照组Ca2+浓度降低,MCU蛋白表达升高(P＜0.05),布地奈德组较哮喘组Ca2+浓度升高,MCU蛋白表达降低(P＜0.05).哮喘组较对照组TEER降低,TRITC升高(P＜0.05),布地奈德组较哮喘组TEER升高,TRITC降低(P＜0.05).哮喘组较对照组ZO-1、E-cadherin的蛋白表达降低(P＜0.05),布地奈德组较哮喘组ZO-1、E-cadherin的蛋白表达升高(P＜0.05).哮喘组较对照组IL-4、IL-5和IL-13的水平升高(P＜0.05),布地奈德组较哮喘组IL-4、IL-5和IL-13的水平降低(P＜0.05).对照组组支气管和肺泡结构未见异常,与对照组相比哮喘组大鼠表现出肺泡间隔增厚,可见的肺毛细血管水肿,以及肺毛细血管和肺泡间隙中的大量炎性细胞浸润(P＜0.05),与哮喘组相比,布地奈德组显著减轻肺部病变的严重程度(P＜0.05).哮喘组较对照组LC3BⅡ/Ⅰ、ATG5、Beclin-1和LC3Ⅱ的表达升高(P＜0.05),布地奈德组较哮喘组LC3BM、ATG5、Beclin-1和LC3Ⅱ的表达降低(P＜0.05).哮喘组较对照组ROS含量和caspase-3活性升高(P＜0.05),布地奈德组较哮喘组ROS含量和caspase-3活性降低(P＜0.05).结论:布地奈德通过调节MCU表达介导气道上皮细胞的屏障完整性和自噬水平,缓解哮喘气道炎症,改善哮喘症状.
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