锤头状核酶抑制Raji细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原的表达

• 作 者: 郭荣 邹萍 金中奎 陆华中 范华骅 高峰 崔磊 曹谊林 张敏
• 机 构: 广东省人民医院血液科,510080,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,上海市血液中心血液工程研究室,上海市血液中心血
• 出 处: 中华器官移植杂志
• 发表日期: 2005年26期
• 关键词: Ⅱ类抗原 Raji 基因 MHCⅡ类 转录因子 基因疗法 Ⅱ类分子 脱氧核糖核酸酶 真核表达载体 稳定转染 亚克隆

目的 探讨抗主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子的锤头状核酶对Raji细胞表面经典MHCⅡ类抗原表达的抑制作用.方法设计并克隆针对MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)第134、218、464位点的3个核酶片段(Rz134、Rz218、Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性筛选.将切割作用明显的Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,成为pIRES2-EGFP-Rz464(pRz464),将pRz464稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测Raji细胞表面MHCⅡ类抗原(HLA-DR、DP、DQ)的表达,并用逆转录聚合酶链反应分析Raji细胞CⅡTA mRNA的表达.结果转染pRz464的Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达抑制率分别为95.93%、94.14%及98.32%,同时其CⅡTA mRNA的表达显著下调(P＜0.05).结论Rz464可抑制Raji细胞表面MHCⅡ类抗原的表达。