【摘 要】
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目的:研究胆固醇对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤是否与细胞内活性氧(ROS)升高有关,明确此种情况下ROS的主要来源。方法:体外培养HUVECs-12,设置正常对照组、溶媒(无水乙醇
【机 构】
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遵义医学院生物化学教研室,上海中医药大学07级博士研究生
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目的:研究胆固醇对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤是否与细胞内活性氧(ROS)升高有关,明确此种情况下ROS的主要来源。方法:体外培养HUVECs-12,设置正常对照组、溶媒(无水乙醇)组、胆固醇组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)作用1 h后再加入胆固醇作用48 h组。以DCFH-DA为荧光探针,流式细胞术检测细胞内ROS水平;免疫细胞化学方法检测细胞内核因子-κB亚单位p65核移位阳性细胞数;分别用比色法、硝酸酶还原法及ELISA检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度。并观察加入产生ROS的4种酶抑制剂二联苯碘(DPI)、鱼藤酮(rotenone)、奥苷嘌醇(oxypurinol)、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)后细胞内ROS水平。结果:(1)与正常对照组比较,50 mg/L胆固醇能升高细胞内ROS(P<0.01),并能激活细胞内NF-κB p65的核移位(P<0.01),升高细胞培养液中LDH活性、MCP-1浓度,降低NO浓度(P<0.01);(2)与胆固醇作用组相比,NADPH氧化酶抑制剂DPI预作用组细胞内ROS明显降低(P<0.01),retenone也可以部分抑制ROS的产生(P<0.05),oxypurinol和L-NAME预作用则几乎不影响胆固醇所致的ROS生成增加(P>0.05)。结论:一定浓度的游离胆固醇能引起内皮细胞内ROS升高,激活细胞内NF-κB,进而导致内皮细胞损伤;此情况下细胞内产生的ROS主要来源于NADPH氧化酶。
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