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丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白.为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达条件进行了优化.结果表明,飞行时间质谱测得产物的分子量为6061.51 Da,通过此法成功制备获得了重组SPINK6蛋白,并且重组SPINK6蛋白对激肽释放酶相关肽酶5(kallikrein-related peptidase 5,KLK5)(Ki=3.02±0.26 nmol/L)和KLK14(Ki=1.85±0.05 nmol/L)有较强的抑制作用,具有生物活性.采用pE-SUMO3质粒为载体,在菌体OD600=0.4时加入1 mmol/L异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达3 h,重组SPINK6蛋白获得最大表达量,1 L培养液中获得重组SPINK63.32 mg.研究结果可为SPINK6蛋白功能及应用研究提供操作性强的制备方法和稳定的蛋白来源.