【摘 要】
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目的研究反义RNA对β-地中海贫血红系细胞IVS2-654C→T(β654)突变mRNA异常剪接的纠正作用.方法构建特异性针对β654mRNA前体异常剪接位点的反义RNA表达载体,和不针对上述位
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目的研究反义RNA对β-地中海贫血红系细胞IVS2-654C→T(β654)突变mRNA异常剪接的纠正作用.方法构建特异性针对β654mRNA前体异常剪接位点的反义RNA表达载体,和不针对上述位点的反义对照载体,转染培养的β654红系细胞后,抽提总RNA;以RT-PCR法作mRNA定量,检测正常和异常剪接的β-珠蛋白mRNA产物的比例[β/(β+β*)];以珠蛋白肽链体外生物合成分析红系细胞中β-和α-珠蛋白肽链合成的比例(β/α).结果在RNA水平,β654/β654纯合子的β/(β+β*)值由0.19(转染后第0天)上升到0.58(第8天),β654/βA杂合子由0.45(0天)上升到0.83(第8天);在珠蛋白肽链水平,β654/β654细胞的β/α值由0.16(0天)上升到0.52(第8天),β654/βA细胞由0.39(0天)上升到0.84(第8天).反义RNA处理βA/βA红系细胞以及对照RNA处理这3类红系细胞,对其mRNA剪接和珠蛋白肽链合成均影响不大.结论特异性反义RNA能抑制红系细胞β654mRNA前体的异常剪接,部分恢复其正常剪接途径,从而改善珠蛋白肽链合成的不平衡状况.
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