【摘 要】
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目的:构建转入γ干扰素(human interferon γ,hIFNy)基因的成肌细胞,探讨hIFN7对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响.方法:①应用基因重组技术,将hIFN7基因克隆到pEGFP-C2真
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目的:构建转入γ干扰素(human interferon γ,hIFNy)基因的成肌细胞,探讨hIFN7对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响.方法:①应用基因重组技术,将hIFN7基因克隆到pEGFP-C2真核表达载体中,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pEGFP-C2-hIFN7的正确性;②经脂质体介导转染C2C12成肌细胞,用RT-PCR和Western Blot法检测转基因细胞的hIFN7表达.③64只7～12周雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分成4组,即A组(注射hIFN7),B组(注射转hIFN7的C2C12细胞),C组(注射空白成肌细胞),D组(未干预).挫伤后第10天,A、B、C组的小鼠,于腓肠肌损伤局部注射不同药物,D组不进行干预以作为自然愈合对照.分别于伤后7、14、28、42天,从各组中随机抽取4只小鼠进行右侧腓肠肌损伤部位取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色检测不同时间点波形蛋白(Vimentin)及Ⅱb型肌球蛋白重链(MHC-Ⅱb)的表达.结果:①酶切和测序结果均证实成功构建了hIFNγ真核表达质粒pEGFP-C2γhIFN7,RT-PCR和Western Blot检测到转染细胞中hIFNγ基因的表达;②干预后各时间点,A、B组小鼠损伤骨骼肌Vimentin表达较C组和D组降低;伤后42天,B组损伤骨骼肌Vimentin表达低于A组,其余时间点A、B两组间无显著差异;③各组MHCⅡb表达无明显差异.结论:①成功制备了含hIFNγ基因的真核表达质粒,转染后获得了高效表达hIFNγ的鼠C2C12成肌细胞;②采用转染hIFNγ的C2C12成肌细胞局部注射,可以抑制骨骼肌纤维化标志产物波形蛋白的表达,与注射外源性IFNγ的作用近似.③局部注射转hIFNγ基因的成肌细胞或外源性IFNγ,未发现对骨骼肌再生标志产物MHC-Ⅱb表达有明显影响.
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