大肠杆菌苹果酸合酶A的酶学和生理功能研究

• 作 者: 王程 王敖 赵旵军 朱国萍
• 机 构: 安徽师范大学生命科学学院,芜湖市第二人民医院检验科
• 出 处: 生物学杂志
• 发表日期: 2011年2期
• 关键词: 苹果酸合酶A 表达 动力学 生长速率 大肠杆菌 malate synthase A expression kinetics growth rate Escher
• 基金项目: 国家自然科学基金（3050030030870062）, 教育部新世纪优秀人才支持计划（NCET-06-0558）,教育部回国留学人员启动基金, 芜湖市自然科学基金重点项目（2009-4-7）, 安徽师范大学优秀创新团队建设计划资助

苹果酸合酶是乙醛酸循环的关键酶之一。E.coli中苹果酸合酶A（malate synthase A,MSA）由aceB基因编码。根据E.coli基因组序列设计引物,利用PCR技术扩增aceB基因,并将其克隆入pET-29b（＋）,构建了重组表达质粒pET-MSA。经IPTG诱导,MSA在E.coliRosetta（DE3）中获得高效表达。纯化的MSA蛋白的分子量大小约为60 kDa,最适反应pH值和最适温度分别是pH值8.0、30℃。纯化的蛋白质在Mg2＋存在时才能发挥最大的活性,其对乙酰辅酶A的Km和V