【摘 要】
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目的用神经营养素-3(NT-3)基因转染小胶质细胞并检测其表达情况。方法小胶质细胞分离纯化后,分为非转染组、空转染组及转染组,非转染组小胶质细胞不经质粒转染,空转染组及转
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目的用神经营养素-3(NT-3)基因转染小胶质细胞并检测其表达情况。方法小胶质细胞分离纯化后,分为非转染组、空转染组及转染组,非转染组小胶质细胞不经质粒转染,空转染组及转染组分别将空质粒pcDNA3.1及真核重组质粒pcDNA3.1/NT-3转染小胶质细胞。然后经过G418筛选后,采用RT-PCR方法检测3组小胶质细胞中的NT-3mRNA水平,酶联免疫吸咐法(ELISA法)检测各组细胞培养液的吸光度值及NT-3蛋白的浓度。结果 RT-PCR检测显示,转染组可得到一250bp的基因片段。ELISA法检测显示,转染组细胞培养液的吸光度值明显高于非转染组及空转染组,差异有显著性(F=57.23,t=14.28、12.93,P<0.05)。转染组细胞培养液NT-3蛋白浓度亦明显高于非转染组及空转染组,差异有显著性(F=49.56,t=15.32、11.47,P<0.05)。结论 NT-3基因成功转染小胶质细胞,并获得高效表达。
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