【摘 要】
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目的 通过摸索尿液的蛋白制备的实验步骤,总结一套适用于尿液的蛋白制备方案及其双向凝胶电泳技术,提高尿液标本2D gel (Two-dimensional polyacrylamide ge,双向电泳胶)的质
【机 构】
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广州市中医医院检验科,广东广州,510130
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目的 通过摸索尿液的蛋白制备的实验步骤,总结一套适用于尿液的蛋白制备方案及其双向凝胶电泳技术,提高尿液标本2D gel (Two-dimensional polyacrylamide ge,双向电泳胶)的质量.方法 对双向电泳实验中的关键环节如蛋白的沉淀,高峰度蛋白的去除等进行实验优化,热考马斯亮蓝染色后进行凝胶图像比较.结果 采用超滤法沉淀蛋白,并结合血清亲和法试剂盒(Albumin and IgG remove kit)去除高峰度蛋白,可以得到分辨率高、约700个蛋白点数的2D胶,质谱鉴定出Tubulin alpha chain-like 3及Tropomyosin beta chain两个蛋白.结论 对超滤沉淀后的蛋白,应用血清亲和法试剂盒(Albumin and IgG remove kit),去除尿液高峰度蛋白,可大大提高尿液标本2D胶的质量,质谱鉴定结果也提示所分离的蛋白与肾脏疾病相关.以上为肾脏疾病蛋白质组学研究奠定基础.
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