【摘 要】
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目的:构建稳定表达x基因编码的乙型肝炎病毒x蛋白(xprotein of hepatitis B virus,HBx)的HepG2细胞,检测其对罗格列酮敏感性的变化,并探讨HBx与过氧化物酶体增殖物激活受体γ
【机 构】
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重庆医科大学临床检验诊断系,重庆医科大学生化与分子生物学教研室
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目的:构建稳定表达x基因编码的乙型肝炎病毒x蛋白(xprotein of hepatitis B virus,HBx)的HepG2细胞,检测其对罗格列酮敏感性的变化,并探讨HBx与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ)之间的相互作用在原发性肝癌形成过程中的可能机制。方法:构建pIRES2-HBx真核表达质粒,筛选稳定表达HBx的HepG2细胞;MTT法检测细胞对罗格列酮的敏感性;免疫细胞化学法检测PPARγ定位的变化;RT-PCR和Western印迹法检测PPARγ的表达。结果:成功构建pIRES2-HBx真核表达质粒,获得稳定表达HBx的HepG2细胞;罗格列酮对该细胞的抑制作用明显降低(P<0.05),经丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的激酶1(mitogen-activated protein kinase/extra-cellular signal-regulated kinase kinase 1,MEK1)抑制剂PD98059预处理后,抑制率有所回升;PPARγ表达量变化的差异无统计学意义,但在细胞中的表达位置发生改变,即从细胞核转至细胞质。结论:HBx可降低HepG2细胞对罗格列酮的敏感性,可能的机制是HBx可改变PPARγ在细胞内的定位以及与DNA的结合能力,并通过磷酸化途径影响PPARγ与配体的结合能力及其活性。
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