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该发明涉及一种真菌碱性丝氨酸蛋白酶及其制备方法和应用。属生物技术领域。该真菌碱性丝氨酸蛋白酶来源于微生物粉红粘帚霉（Gliocladium roscum）GR8；粉红粘帚霉GR7菌株通过液体发酵后提取纯化碱性丝氨酸蛋白酶。该酶能降解线虫体壁的蛋白质，具有杀线虫活性，可以用于植物寄生线虫生物防治领域。也可作为洗涤剂和去污剂生产的添加用酶。应用于洗涤剂和去污剂的生产上。该产品具有酶活力高，对线虫固定效果好，酶学性质特征优越等优点。