重组结核分枝杆菌精氨酰tRNA合成酶活性验证及晶体生长

• 作 者: 王炜 陈磊 陈明心 张岱 蒋露 任伟宏
• 机 构: 河南中医药大学第一附属医院,中国医学科学院病原生物学研究所
• 出 处: 中国人兽共患病学报
• 发表日期: 2021年5期
• 关键词: 结核分枝杆菌 精氨酰tRNA合成酶 重组表达 结晶
• 基金项目: 协和青年科研基金项目(No.3332015005)。

目的建立重组结核分枝杆菌ArgRS的制备方法,并验证重组蛋白的生物活性。方法将结核分枝杆菌ArgRS基因插入到pQE60质粒中,通过IPTG诱导表达重组蛋白,使用分子筛制备重组蛋白,并评价重组蛋白分子量。使用圆二色谱评价重组蛋白的折叠情况。通过Thermal Shift Assay进一步验证重组蛋白的生物活性。采用气相扩散法筛选晶体。结果使用pQE60载体获得了重组表达的ArgRS蛋白。凝胶过滤层析纯化重组蛋白并验证了其分子量与天然蛋白一致;Thermal Shift Assay证明重组蛋白的生物活性。使