hBcl-2和hVEGF165双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作 者: 倪晓彬 陈敏生 刘世明 何晓青 刘启才 董颀 赵路宁
• 机 构: 广州医学院第二附属医院广州心血管疾病研究所,广东省汕头市中心医院,广州医学院第三附属医院心内科,广州医学院实验医学研究中心
• 出 处: 广东医学
• 发表日期: 2010年3期
• 关键词: hBcl-2基因 hVEGF165基因 双基因共表达 腺病毒载体 hBcl - 2 gene hVEGF165 gene co - expression

目的构建hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础。方法通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF165基因片段,并克隆到pMD-19T载体。将目的基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF165依次定向克隆到腺病毒穿梭载体质粒pAd-Track-CMV上。线性化重组穿梭质粒后通过电穿孔转化含有腺病毒骨架质粒pAd-easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒。脂质体转染线性化的重组腺病毒载体质粒于HEK293细