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背景:新型组织工程材料和许旺细胞扩增后置入生物合成管内去修复周围神经的缺损,是人工生物材料管的两大进展.目的:以胶原几丁糖为支架,以激活态的许旺细胞为种子细胞,观察二者的亲和性以及激活态的许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律,为人工神经的预构做准备.设计:开放性实验.单位:复旦大学附属华山医院手外科.材料:实验于2003-07/2003-12在卫生部手功能重建重点实验室完成.选取清洁级雄性SD大鼠4只.胶原几丁糖膜(上海其胜生物材料技术研究所提供),许旺细胞激活液(自制).方法:大鼠麻醉后坐骨神经切断预变性7 d,再次麻醉后引颈处死,迅速切取双侧坐骨神经,置于含青霉素和链霉素的D-HANKS液中,剔除神经外膜,剪碎成1 mm的小段,移入盛有质量浓度为5g/L的胰蛋白酶和0.6g/L的胶原酶的离心管中,每2 mL液体中加入激活液0.5 mL,复合酶分步消化法获激活态许旺细胞,以浓度为2×107 L-1激活态的许旺细胞200 μL接种于胶原几丁糖膜上和培养皿上,2周后通过相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况,S-100染色鉴定细胞的纯化程度.主要观察指标:①绘制细胞生长曲线,确定体外倍增时间.②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果.③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果.结果:①体外倍增时间的确定:激活态的许旺细胞接种于胶原几丁糖膜和培养皿上时的浓度均是2×107 L-1,2周后细胞浓度分别达到30×107 L-1和20×107 L-1.根据DT=(t-t0)lg2/(lgn-lgn0)算出激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的倍增时间为4 d.②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果:接种于培养皿上的激活态许旺细胞24 h后大多数由圆球形变成长梭形,有突起,多为双极,也有的呈三极状;接种于膜上的激活态许旺外形上和培养皿中无明显差异,但膜上的激活态许旺细胞在相差显微镜下犹如刻在沙地上的文字一般.S-100染色见激活态许旺细胞成棕色,纯度达95%以上.③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果:激活态许旺细胞多数生长于胶原几丁糖膜的凹陷中或紧贴膜表面,呈有规律的首尾相接贴附于膜上,胞体呈纺锤形,直径在4～6 μm,长度为60～80 μm,细胞呈梭形,有许多细小分枝.1周时膜的形态仍然完整.结论:胶原几丁糖膜和高度纯化的激活态许旺细胞有良好的亲和性,以其为工艺材料制成的组织工程支架很有可能在促进周围神经再生中发挥优势作用.