【摘 要】
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目的 研究靶向敲除CDK2对人黑素瘤移植瘤中miRNA表达谱的影响.方法 设计CDK2的sgRNA靶向序列,构建含有sgCDK2-108的重组CRISP/Cas9慢病毒质粒并转染至HEK293T细胞进行重组慢
【机 构】
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厦门市第三医院皮肤科,福建厦门,361100;承德医学院基础医学院,河北承德,067000
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目的 研究靶向敲除CDK2对人黑素瘤移植瘤中miRNA表达谱的影响.方法 设计CDK2的sgRNA靶向序列,构建含有sgCDK2-108的重组CRISP/Cas9慢病毒质粒并转染至HEK293T细胞进行重组慢病毒的包装和纯化.在SPF级的BALB/c-nude小鼠右前肢腋下皮下注射1×10 7个人黑素瘤细胞A375进行体外移植瘤小鼠模型构建.移植瘤成瘤第35天时,瘤内注射1×107 TU的重组sgCDK2-108和sgCDK2-NC慢病毒并继续培养30 d后收集样本.miRNA高通量测序检测靶向敲除CDK2后移植瘤内miRNA表达谱的改变、进行miRNA靶基因、GO富集分析、KEGG通路分析、新型miRNA鉴定及二级结构预测.结果 sgCDK2-108慢病毒感染组与sgCDK2-NC阴性慢病毒感染组相比,共鉴定出762个miRNA,其中上调表达35个miRNA、下调表达13个miRNA;与移植瘤组相比,共鉴定出754个miRNA,其中上调表达28个miRNA、下调表达4个miRNA.miR-1 a-3p、miR-133a-3p、miR-133b-3p和miR-375-3p为共同差异表达miRNA且具有多个潜在靶分子.GO分析显示miRNA靶基因功能主要为细胞代谢调控等,KEGG通路分析显示主要涉及RNA降解和自噬等.共鉴定出290个新型miRNA且具有“V”型或“直线”型两种结构.结论 靶向敲除CDK2能够改变人黑素瘤移植瘤内的miRNA表达谱.
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