【摘 要】
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目的:构建人NHERF4真核表达质粒,转染人结肠癌Caco2细胞,建立能稳定携带NHERF4基因并高表达的Caco2细胞株,为后期相关实验奠定基础.方法:利用真核表达载体pIRES2-ZsGreen1构
【机 构】
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石河子大学医学院第一附属医院消化内科,新疆石河子,832008;石河子大学医学院第一附属医院肝胆外科,新疆石河子,832008
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目的:构建人NHERF4真核表达质粒,转染人结肠癌Caco2细胞,建立能稳定携带NHERF4基因并高表达的Caco2细胞株,为后期相关实验奠定基础.方法:利用真核表达载体pIRES2-ZsGreen1构建人NHERF4 cDNA真核表达质粒,脂质体介导质粒pIRES2-ZsGreen1和NHERF4表达质粒pIRES2-ZsGreen 1-NHERF4转染人结肠癌细胞Caco2,荧光显微镜观察判断转染结果.G418筛选稳转细胞株,共聚焦免疫荧光观察NHERF4的亚细胞定位表达,蛋白免疫印迹实验观察NHERF4蛋白表达.结果:荧光显微镜观察证实质粒pIRES2-ZsGreen1和NHERF4表达质粒pIRES2-ZsGreen 1-NHERF4均成功转染Caco2细胞.蛋白免疫印迹实验证实转染pIRES2-ZsGreen 1-NHERF4质粒的Caco2细胞高表达NHERF4蛋白.结论:成功建立稳定表达外源NHERF4蛋白的pIRES2-ZsGreen 1-NHERF4Caco2细胞株,为能进一步分析研究NHERF4与MPR2在结肠癌多药耐药机制中的作用奠定了前期实验基础.
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