【摘 要】
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目的克隆、表达和鉴定肠道病毒71型(EV71)VP1基因,得到可溶性的蛋白VP1,为制备EV71的抗体和诊断试剂的开发打下基础。方法优化EV71VP1蛋白基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b
【机 构】
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常州二十一世纪生物技术研究所有限公司,常州市第一人民医院检验科,
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目的克隆、表达和鉴定肠道病毒71型(EV71)VP1基因,得到可溶性的蛋白VP1,为制备EV71的抗体和诊断试剂的开发打下基础。方法优化EV71VP1蛋白基因,克隆并构建重组表达质粒pET15b/VP1,转化大肠杆菌BL21。使用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Westernblotting检测目的蛋白。以重组蛋白VP1为抗原,ELISA检测抗原活性。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量为36000,与预计大小一致。ELISA实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了EV71VP1蛋白,并得到可溶性的蛋白,对肠道病毒71型诊断试剂的开发有进一步潜在的应用价值。
Objective To clone, express and identify the VP1 gene of enterovirus 71 (EV71) and obtain soluble protein VP1, which lays a foundation for the development of antibodies and diagnostic reagents for EV71 production. Methods The EV71VP1 gene was optimized and cloned. The recombinant plasmid pET15b / VP1 was constructed and transformed into E. coli BL21. The recombinant protein was purified using Ni2 + affinity chromatography and the target protein was detected by Western blotting. The recombinant protein VP1 was used as antigen to detect the activity of antigen. Results The recombinant protein was highly expressed in E. coli. SDS-PAGE showed that the molecular weight of the recombinant protein was 36,000, which was consistent with the expected size. ELISA experiments confirmed that the recombinant protein has good antigenicity. Conclusion The present study successfully cloned and expressed EV71VP1 protein and obtained soluble protein, which has further potential value for the development of enterovirus 71 diagnostic reagent.
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