【摘 要】
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本实验以抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织27-1为材料,运用正交实验方法探究其超低温冷冻保存方法.结果 表明:预培养时间、二甲基亚砜(DMSO)浓度、蔗糖浓度、聚乙二醇(PEG) 80
【机 构】
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南京林业大学林学院,南京,210037;南京林业大学,南方现代林业协同创新中心,南京,210037
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本实验以抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织27-1为材料,运用正交实验方法探究其超低温冷冻保存方法.结果 表明:预培养时间、二甲基亚砜(DMSO)浓度、蔗糖浓度、聚乙二醇(PEG) 8000浓度和解冻温度对解冻后愈伤组织的活性均有显著影响.结合解冻后愈伤组织活力及其恢复生长情况,得出效果较好的超低温保存方法为:继代培养10 ~12 d生长状态良好的愈伤组织,添加0.5 mol/L蔗糖的高渗培养基预培养36 h;5% DMSO,15% PEG 4000,0.5 mol/L蔗糖3种冷冻保护剂组合使用,程序降温至-80℃停留30 min后投入液氮罐中保存;32℃水浴解冻,蔗糖溶液清洗后转接至LP培养基上恢复生长.在此程序处理下,冷冻90d的愈伤组织1个月后可恢复再生,再生率最高达100%,再生愈伤组织生长状态良好并依然保持分化成熟体胚的能力.
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