慢病毒介导的mTOR敲低肝癌细胞株HepG2的构建及初步功能检测

• 作 者: 刘家宏 徐小洁 符静 范忠义 吕朝晖 陆菊明 肖文华 朱建华
• 机 构: 军事医学科学院生物工程研究所,解放军总医院第一附属医院肿瘤一科,解放军总医院内分泌科
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2013年4期
• 关键词: 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 RNA干扰 慢病毒 mammalian target of rapamycin RNA interference lentiviru
• 基金项目: 国家自然科学基金（30872939,31100604）

目的：建立高效稳定的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）小干扰RNA（siRNA）细胞导入方法，并对mTOR敲低的HepG2肝癌细胞株的功能进行初步检测。方法：构建了2条不同的人roTOR慢病毒siRNA载体pLenti—H1／mTORsiRNA，与3个包装质粒共转染293T细胞，包装成慢病毒后感染HepG2细胞；经嘌呤霉素筛选2周后，收集细胞进行Western印迹，检测mTOR敲减效果及其下游基因c—myc、周期蛋白D1（cyclinDI）表达水平及4E—BP1、S6K1磷酸化水平的变化。结果：RT—PC