【摘 要】
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目的构建野生型人脂蛋白脂酶（LPL）和联合突变体的pET28a（＋）原核表达载体，蛋白纯化后制备突变型多克隆抗体。方法采用RT-PCR技术从人肾周脂肪组织中获得野生型LPLcDNA，酶切和测序鉴定
【机 构】
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上海交通大学医学院仁济医院内分泌代谢病科
【基金项目】
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国家自然科学基金（30670988）
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目的构建野生型人脂蛋白脂酶（LPL）和联合突变体的pET28a（＋）原核表达载体，蛋白纯化后制备突变型多克隆抗体。方法采用RT-PCR技术从人肾周脂肪组织中获得野生型LPLcDNA，酶切和测序鉴定后插入原核表达载体pET28a（＋），通过两次定点诱变得到pET28a（＋）-Asn291Ser和Lys312inC联合突变LPL，酶切和测序鉴定后分别转染大肠杆菌BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，SDS-PAGE电泳分析；镍柱亲和层析纯化，Western blotting鉴定；将纯化后的突
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