论文部分内容阅读
摘要[目的]通过体外抗氧化体系比较黑豆不同部分馏油抗氧化性活性。[方法]通过正交试验优化索氏提取黑豆馏油的最佳工艺，提取黑豆不同部分馏油；研究黑豆不同部分馏油对羟基自由基（·OH）、DPPH自由基（DPPH·）的清除能力。[结果]在样品浓度为1.0 mg/mL时，黑豆不同部分馏油对·OH的清除率分别为全豆馏油83.9%、豆黄（黑豆去皮部分）馏油64.8%、豆皮馏油17.3%，对DPPH·的清除率分别为全豆馏油41.3%、豆黃馏油33.2%、豆皮馏油77.9%。[结论]黑豆不同部分馏油均具有较好的抗氧化性，是良好的天然抗氧化剂。黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油，对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。
关键词黑豆；黑豆馏油；抗氧化性；比较
中图分类号S529文献标识码
A文章编号0517-6611（2017）20-0121-02
Abstract[Objective] This research aimed to study the antioxidant activity of distillation oil of different parts of black beans in different antioxidant systems separately.[Method]The optimum process of the extraction of black beans distillate oil was optimized by orthogonal test，the distillation oil from different parts of black beans were extracted.The scavenging ability of hydroxyl radical （·OH） and DPPH free radical （DPPH·） in distillation oil of different parts of black beans were studied.[Result]When the concentration of the sample was 1.0 mg/mL， the removal rate of different parts of the black beans distillation oil to ·OH was 83.9% of the whole bean distillate oil， 64.8% of beans without peel and 17.3% of bean peel， the removal ability of DPPH· was 41.3% of the whole bean distillate oil， 33.2% of beans without peel and 77.9% of bean peel.[Conclusion]Distillation oil of different parts of the black beans has strong antioxidant capacity and it is a good natural antioxidant.The black beans different parts of distillation oil on the ·OH scavenging ability： whole bean>bean without peel>bean peel；DPPH· scavenging ability： bean peel> whole bean> bean without peel.
Key wordsBlack beans； Black beans distillation oil；Antioxidant activity； Comparison
黑豆，豆科植物大豆[Glycine max（L.）Merr]的干燥种子，又名乌豆，经干馏而得的黑色粘稠液体就是黑豆馏油[1]，在陕西和山西民间常用来治療顽固性皮肤病，如银屑病、神经性皮炎、婴儿湿疹、玫瑰糠疹等临床常见、多发的皮肤病。据报道， 以黑豆馏油为主要成分的复方制剂， 具有消炎[2]、收敛、止痒、再生角质的功能， 对神经性皮炎、亚急性、慢性皮炎及慢性湿疹等皮肤病有显著疗效[3-4]。与西药相比，黑豆馏油疗效好、刺激性小、治疗皮肤病范围广、疗效高、周期短、价廉、易于制作，但其缺点是黑豆馏油传统制备浓黑焦臭，涂抹不方便，易污染衣物，且清洗困难，气味浓重，影响患者的正常工作与学习，给患者造成很大的身心压力。因此研究黑豆馏油中的有效成分或改进制作方法来改良馏油性状，使其便于使用是非常必要的。
我国黑豆资源丰富，其营养价值和药用价值都极高[5-7]，但目前黑豆深加工研究较少，主要集中于黑豆酿造酱油[8-9]、黑豆色素[10-11]分析等，综合利用程度低，对于黑豆的药用价值开发不足[12-13]。黑豆馏油是纯天然的药物，具有疗效高、无毒副作用的优势，然而使用过程的弊端明显，不便于大面积使用，因此研究黑豆不同部分的活性，对黑豆馏油的加工工艺改进以及黑豆馏油有效成分的分离都有重要的意义。
笔者对黑豆不同部分的黑豆馏油在不同的抗氧化体系中的抗氧化性进行比较，可以作为分析黑豆馏油有效成分的来源以及如何改良黑豆馏油不良性状的重要依据，为黑豆的深加工提供新的思路。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试材。黑豆取自陕北榆林市横山县主产区，成熟期采摘。自然晾干，手工分离豆皮和豆黄，65 ℃烘干至恒重，粉碎呈一定的颗粒度，密封保存。
1.1.2试剂。正丁醇，天津市瑞金特化学有限公司；无水乙醇，天津市致远化学试剂有限公司；七水合硫酸亚铁，天津市恒心化学试剂制造有限公司；双氧水（30%），天津市致远化学试剂有限公司；水杨酸，天津市津北精细化工有限公司；盐酸，四川西陇化工有限公司；二苯基苦味肼基（DPPH），北京中生瑞泰科技有限公司。 1.1.3仪器与设备。
DHG-9013A型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；WK-200B小型高速粉碎机，潍坊市北方制药化学有限公司；BS224S型电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；MH-250型电子调温电热套，北京科伟永兴仪器有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵，郑州汇成科工贸易有限公司；RE-2000A旋转蒸发器，巩义市予华仪器有限公司；722S可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；DZF-6050型真空干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；HH-1型数显恒温水浴锅，金坛市丹阳门石英玻璃厂。
1.2方法
1.2.1黑豆馏油的提取工艺流程。
黑豆不同部分原料→粉碎→过标准筛→称重→加入正丁醇→索氏提取→离心分离→上清液→浓缩→定容→测总馏油含量。
参考文献[14]，通过单因素试验，研究不同溶剂、提取时间、料液比、粉碎度对黑豆馏油提取率的影响，在单因素试验的基础上，设计正交试验，优化黑豆馏油的最佳提取工艺为：正丁醇作提取剂，提取135 min，料液比为1∶25（g∶mL），粉碎度为40目，分别称取黑豆皮、黑豆黄和完整黑豆的粉末3.250 0 g，用滤纸包起来，进行索氏提取，浓缩溶剂后，得不同部分的黑豆馏油，备用。
1.2.2
黑豆不同部分馏油样品的配制。分别称取全豆馏油、豆皮馏油和豆黄馏油各0.020、0.040、0.060、0.080、1.000 g，用无水乙醇定容于100 mL的容量瓶中，分别配制成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的黑豆不同部分的馏油样品，摇匀待用。
1.2.3黑豆不同部分馏油对羟基自由基（·OH）的清除能力。
以郭雪峰等[15]的方法为参考，并做了相应的改进。
取6支25 mL比色管，分别加入1.00 mL 9 mmol/L水杨酸的无水乙醇溶液（空白对照为等量的蒸馏水）和1.00 mL 0.9 mmol/L缓冲溶液七水合硫酸亚铁溶液，摇匀，再加入1.00 mL不同浓度样品溶液（空白对照），最后加入1.00 mL 1% H2O2溶液（空白对照为等量的蒸馏水），充分摇匀。在37 ℃恒温水浴中反应30 min，以蒸馏水为参比，在波长510 nm处测量各浓度溶液的吸光度。按下式计算其清除率：
清除率=Ab-AcAa-Ac×100%
式中，Aa为不加H2O2、加样品时的吸光度；Ab为加H2O2、加样品时的吸光度；Ac为加H2O2、不加样品时的吸光度。
1.2.4黑豆不同部分馏油对DPPH·的清除能力测定。
参考吴夏花等[16]的方法，并做了相应的改进。取5支25 mL比色管，分别加入2.00 mL不同浓度的样品溶液（不加样品溶液时以等量溶剂无水乙醇代替），再在避光的环境下加入2.00 mL 6.0×10-5 mol/L的DPPH无水乙醇溶液，充分混合摇匀，30 min后用无水乙醇作参比，置于波长为517 nm处测定吸光度。按下式计算其清除率：
清除率=Aa-AbAa×100%
其中，Aa为不加样品、加DPPH无水乙醇的吸光度；Ab为加样品、加DPPH无水乙醇的吸光度。
2結果与分析
2.1不同部分黑豆馏油对·OH的清除能力比较
从图1可以看出，黑豆不同部分馏油均具有清除·OH的能力，并且自由基的清除能力与样品浓度呈现明显的正相关关系，自由基清除率随样品浓度的升高而增大。当馏油浓度为1.0 mg/mL时，全豆馏油的清除率达83.9%，豆黄馏油达64.8%，豆皮馏油仅为17.3%，可见，豆皮馏油对·OH的清除能力不及全豆、豆黄馏油，全豆馏油比豆黄馏油清除率略好。所以，在样品溶液浓度相等的条件下，全豆馏油对·OH的清除率最好。
2.2不同部分黑豆餾油对DPPH·的清除能力比较
从图2可以看出，黑豆不同部分馏油均具有清除DPPH·的能力，并且DPPH·的清除能力与样品浓度呈现明显的正相关关系，自由基清除率随样品浓度的升高而增大。
当馏油浓度为1.0 mg/mL时，全豆馏油的清除率达41.3%，豆黄馏油达33.2%，豆皮馏油达77.9%，可见，豆皮馏油对DPPH·的清除能力明显强于全豆、豆黄馏油，全豆馏油比豆黄馏油略强。所以，在样品溶液浓度相等的条件下，豆皮馏油对DPPH·的清除率最好。
3结论
该试验研究黑豆不同部分制备的馏油，并分别比较其对·OH、DPPH·的清除效果，结果表明，黑豆不同部分馏油均具有一定的清除DPPH·和·OH的能力，表现出较好的抗氧化活性，其浓度与抗氧化活性呈正相关，但对于不同的自由基黑豆不同部分的馏油表现出不同程度的清除效果。在样品液浓度相同的情况下，黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油；对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。
参考文献
[1]
彭懿，贾天柱.几种馏油剂的研究进展[J]. 中成药，2007，29（5）：734-736.
[2] 王凯，向翠英，张琼.黑豆馏油凝胶抗炎作用及抗炎特点研究[J].云南中医中药杂志， 2009，30（12）： 56，58.
[3] 冷明，钱林书.黑豆馏油治疗银屑病35例疗效观察[J].皮肤病与性病，1990（3）：36.
[4] 严晓峰.5%黑豆馏油治疗30例婴儿湿疹疗效观察[J].中国民族民间医药，2012， 21（19）：73.
关键词黑豆；黑豆馏油；抗氧化性；比较
中图分类号S529文献标识码
A文章编号0517-6611（2017）20-0121-02
Abstract[Objective] This research aimed to study the antioxidant activity of distillation oil of different parts of black beans in different antioxidant systems separately.[Method]The optimum process of the extraction of black beans distillate oil was optimized by orthogonal test，the distillation oil from different parts of black beans were extracted.The scavenging ability of hydroxyl radical （·OH） and DPPH free radical （DPPH·） in distillation oil of different parts of black beans were studied.[Result]When the concentration of the sample was 1.0 mg/mL， the removal rate of different parts of the black beans distillation oil to ·OH was 83.9% of the whole bean distillate oil， 64.8% of beans without peel and 17.3% of bean peel， the removal ability of DPPH· was 41.3% of the whole bean distillate oil， 33.2% of beans without peel and 77.9% of bean peel.[Conclusion]Distillation oil of different parts of the black beans has strong antioxidant capacity and it is a good natural antioxidant.The black beans different parts of distillation oil on the ·OH scavenging ability： whole bean>bean without peel>bean peel；DPPH· scavenging ability： bean peel> whole bean> bean without peel.
Key wordsBlack beans； Black beans distillation oil；Antioxidant activity； Comparison
黑豆，豆科植物大豆[Glycine max（L.）Merr]的干燥种子，又名乌豆，经干馏而得的黑色粘稠液体就是黑豆馏油[1]，在陕西和山西民间常用来治療顽固性皮肤病，如银屑病、神经性皮炎、婴儿湿疹、玫瑰糠疹等临床常见、多发的皮肤病。据报道， 以黑豆馏油为主要成分的复方制剂， 具有消炎[2]、收敛、止痒、再生角质的功能， 对神经性皮炎、亚急性、慢性皮炎及慢性湿疹等皮肤病有显著疗效[3-4]。与西药相比，黑豆馏油疗效好、刺激性小、治疗皮肤病范围广、疗效高、周期短、价廉、易于制作，但其缺点是黑豆馏油传统制备浓黑焦臭，涂抹不方便，易污染衣物，且清洗困难，气味浓重，影响患者的正常工作与学习，给患者造成很大的身心压力。因此研究黑豆馏油中的有效成分或改进制作方法来改良馏油性状，使其便于使用是非常必要的。
我国黑豆资源丰富，其营养价值和药用价值都极高[5-7]，但目前黑豆深加工研究较少，主要集中于黑豆酿造酱油[8-9]、黑豆色素[10-11]分析等，综合利用程度低，对于黑豆的药用价值开发不足[12-13]。黑豆馏油是纯天然的药物，具有疗效高、无毒副作用的优势，然而使用过程的弊端明显，不便于大面积使用，因此研究黑豆不同部分的活性，对黑豆馏油的加工工艺改进以及黑豆馏油有效成分的分离都有重要的意义。
笔者对黑豆不同部分的黑豆馏油在不同的抗氧化体系中的抗氧化性进行比较，可以作为分析黑豆馏油有效成分的来源以及如何改良黑豆馏油不良性状的重要依据，为黑豆的深加工提供新的思路。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试材。黑豆取自陕北榆林市横山县主产区，成熟期采摘。自然晾干，手工分离豆皮和豆黄，65 ℃烘干至恒重，粉碎呈一定的颗粒度，密封保存。
1.1.2试剂。正丁醇，天津市瑞金特化学有限公司；无水乙醇，天津市致远化学试剂有限公司；七水合硫酸亚铁，天津市恒心化学试剂制造有限公司；双氧水（30%），天津市致远化学试剂有限公司；水杨酸，天津市津北精细化工有限公司；盐酸，四川西陇化工有限公司；二苯基苦味肼基（DPPH），北京中生瑞泰科技有限公司。 1.1.3仪器与设备。
DHG-9013A型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；WK-200B小型高速粉碎机，潍坊市北方制药化学有限公司；BS224S型电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；MH-250型电子调温电热套，北京科伟永兴仪器有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵，郑州汇成科工贸易有限公司；RE-2000A旋转蒸发器，巩义市予华仪器有限公司；722S可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；DZF-6050型真空干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；HH-1型数显恒温水浴锅，金坛市丹阳门石英玻璃厂。
1.2方法
1.2.1黑豆馏油的提取工艺流程。
黑豆不同部分原料→粉碎→过标准筛→称重→加入正丁醇→索氏提取→离心分离→上清液→浓缩→定容→测总馏油含量。
参考文献[14]，通过单因素试验，研究不同溶剂、提取时间、料液比、粉碎度对黑豆馏油提取率的影响，在单因素试验的基础上，设计正交试验，优化黑豆馏油的最佳提取工艺为：正丁醇作提取剂，提取135 min，料液比为1∶25（g∶mL），粉碎度为40目，分别称取黑豆皮、黑豆黄和完整黑豆的粉末3.250 0 g，用滤纸包起来，进行索氏提取，浓缩溶剂后，得不同部分的黑豆馏油，备用。
1.2.2
黑豆不同部分馏油样品的配制。分别称取全豆馏油、豆皮馏油和豆黄馏油各0.020、0.040、0.060、0.080、1.000 g，用无水乙醇定容于100 mL的容量瓶中，分别配制成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的黑豆不同部分的馏油样品，摇匀待用。
1.2.3黑豆不同部分馏油对羟基自由基（·OH）的清除能力。
以郭雪峰等[15]的方法为参考，并做了相应的改进。
取6支25 mL比色管，分别加入1.00 mL 9 mmol/L水杨酸的无水乙醇溶液（空白对照为等量的蒸馏水）和1.00 mL 0.9 mmol/L缓冲溶液七水合硫酸亚铁溶液，摇匀，再加入1.00 mL不同浓度样品溶液（空白对照），最后加入1.00 mL 1% H2O2溶液（空白对照为等量的蒸馏水），充分摇匀。在37 ℃恒温水浴中反应30 min，以蒸馏水为参比，在波长510 nm处测量各浓度溶液的吸光度。按下式计算其清除率：
清除率=Ab-AcAa-Ac×100%
式中，Aa为不加H2O2、加样品时的吸光度；Ab为加H2O2、加样品时的吸光度；Ac为加H2O2、不加样品时的吸光度。
1.2.4黑豆不同部分馏油对DPPH·的清除能力测定。
参考吴夏花等[16]的方法，并做了相应的改进。取5支25 mL比色管，分别加入2.00 mL不同浓度的样品溶液（不加样品溶液时以等量溶剂无水乙醇代替），再在避光的环境下加入2.00 mL 6.0×10-5 mol/L的DPPH无水乙醇溶液，充分混合摇匀，30 min后用无水乙醇作参比，置于波长为517 nm处测定吸光度。按下式计算其清除率：
清除率=Aa-AbAa×100%
其中，Aa为不加样品、加DPPH无水乙醇的吸光度；Ab为加样品、加DPPH无水乙醇的吸光度。
2結果与分析
2.1不同部分黑豆馏油对·OH的清除能力比较
从图1可以看出，黑豆不同部分馏油均具有清除·OH的能力，并且自由基的清除能力与样品浓度呈现明显的正相关关系，自由基清除率随样品浓度的升高而增大。当馏油浓度为1.0 mg/mL时，全豆馏油的清除率达83.9%，豆黄馏油达64.8%，豆皮馏油仅为17.3%，可见，豆皮馏油对·OH的清除能力不及全豆、豆黄馏油，全豆馏油比豆黄馏油清除率略好。所以，在样品溶液浓度相等的条件下，全豆馏油对·OH的清除率最好。
2.2不同部分黑豆餾油对DPPH·的清除能力比较
从图2可以看出，黑豆不同部分馏油均具有清除DPPH·的能力，并且DPPH·的清除能力与样品浓度呈现明显的正相关关系，自由基清除率随样品浓度的升高而增大。
当馏油浓度为1.0 mg/mL时，全豆馏油的清除率达41.3%，豆黄馏油达33.2%，豆皮馏油达77.9%，可见，豆皮馏油对DPPH·的清除能力明显强于全豆、豆黄馏油，全豆馏油比豆黄馏油略强。所以，在样品溶液浓度相等的条件下，豆皮馏油对DPPH·的清除率最好。
3结论
该试验研究黑豆不同部分制备的馏油，并分别比较其对·OH、DPPH·的清除效果，结果表明，黑豆不同部分馏油均具有一定的清除DPPH·和·OH的能力，表现出较好的抗氧化活性，其浓度与抗氧化活性呈正相关，但对于不同的自由基黑豆不同部分的馏油表现出不同程度的清除效果。在样品液浓度相同的情况下，黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油；对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。
参考文献
[1]
彭懿，贾天柱.几种馏油剂的研究进展[J]. 中成药，2007，29（5）：734-736.
[2] 王凯，向翠英，张琼.黑豆馏油凝胶抗炎作用及抗炎特点研究[J].云南中医中药杂志， 2009，30（12）： 56，58.
[3] 冷明，钱林书.黑豆馏油治疗银屑病35例疗效观察[J].皮肤病与性病，1990（3）：36.
[4] 严晓峰.5%黑豆馏油治疗30例婴儿湿疹疗效观察[J].中国民族民间医药，2012， 21（19）：73.