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摘要高效液相色谱技术具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、适用范围广等优点,在中药分析研究中有着广阔的应用和发展前景。通过查询相关文章,从高效液相色谱技术在中药研究中的应用现状、研究对象以及发展前景等方面对高效液相色谱技术在中药研究中的应用进展做详细的介绍。
关键词高效液相色谱;中药研究;应用进展
中图分类号R927文献标识码A文章编号1673-9671-(2010)071-0091-01
高效液相色谱技术(HPLC)是60年代末期,通过改进填料的粒度及柱压,在经典液相柱色谱的基础上引进气相色谱的理论与技术,并加以改进而发展起来的一种重要的分离分析方法,HPLC在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化分离机制,是靠被分离组分的分子与流动相分子争夺吸附表面活性中心的吸附能力差别而分离(可用吸附系数Ka衡量吸附能力的差异),是现代分离分析的重要手段。它具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全的优点,特别适合高沸点、大分子和热稳定性差的化合物的分离分析测试,在医药卫生、食品、环保等各个领域已得到了广泛的应用。尤其渗透到中药研究的各个领域,在中药的研究中发挥着越来越重要的作用。
1高效液相色谱法分离过程
试样被高效液相色谱法(HPLC)的流动相带入色谱柱并在柱中移动,试样中各组分在两相中发生溶解与解析、吸附与脱附、渗透与排阻,离子交换或亲和作用等,经过反复分配和平衡多次,由于各组分在固定相中的分配系数或溶解、吸附、交换、渗透及亲和能力等有差异,各组分在色谱柱中的滞留时间或将组分带出色谱柱所需流动相的体积(即保留值)也就不同,即它们在柱中向前移动的速度不同。随着流动相不断流过,组分在柱中两相间经过了反复多次的分配和平衡过程,当移动一定柱长以后,试样中各组分即可得到较完整的分离,顺序离开色谱柱进入检测器,产生的离子流信号经放大后,在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
2高效液相色谱技术在中药研究的发展近况
2.1中药质量控制
2.1.1中药有效成分和有效部位测定
中药质量的评价与控制是中药现代化研究的重要内容,测定其与功用有关活性成分的含量和活性部位是关键。中药有效成分的测定已成为评估中药质量的重要标志,实践经验证明,HPLC的适用范围较广,可用于分析高沸点、热不稳定性、大分子量的样品,是一种非常有效和普遍适用的中药有效成分的分析方法。采用HPLC技术,建立中药有效部位分析的方法,确保中药材及其制剂的质量和临床疗效等的研究和应用日益广泛。
2.1.2中药指纹图谱的确定
利用HPLC技术进行中药的标准化,建立药材或中成药特征的色谱或光谱的图谱是一种有效的方法。如在对中药山茱萸药材的括纹图谱的研究中,采用相关系数法计算不同样品指纹图谱之问相似度,结果表明指纹图谱相似度大小与药材品质有关。
2.1.3中药炮制方面的应用
研究炮制机理,探索炮制前后化学成分变化,合理制定炮制工艺是当前中药炮制研究和中药生产的重要环节。采用HPLC法测定干姜,姜皮,炮制姜中的辣味成分的姜酚含量,姜酚易受热发生逆羟醛缩合降升反应,在气相色谱分析中难以获得准确结果。HPLC法分离效果最好,在常温下操作,是测定姜酚等辣味成分的理想方法。
2.2中药药物动力学研究
2.2.1中药有效成分的药动学研究
高效液相色谱法具有高灵敏度和高专属性特点,以满足药物动力学研究中复杂介质中痕量成分准确定量的要求,自80年代用于中草药药代动力学研究以来,现已成为中药药代动力学研究的主要手段。
2.2.2药物代谢动力学的研究
实验者通过检测不同组织中药物的浓度来观察药物吸收、分布情况。厉将斌等利用HPLC技术研究前列栓给药途径选择的药动学依据,实验证明:灌胃与肛寨相比的相对生物利用度仅为26.07%和6.18%;前列腺组织药物浓度,经肛塞途径能测到部分1～2h时问点的小檗碱浓度,但不足以构成可分析的浓度一时问曲线,而灌胃途径则根本无法测到小檗碱浓度,两组间差异极显菩。经肛塞给药有以下优点:吸收速度快、血药浓度高、血药有效浓度维持时间长、靶器官前列腺组织内药物浓度相对较高,且药动学参数随兔不同而有较大的差异。游剑等应用HPLC研究莪术油的药动学,静注给药后吉玛酮在大鼠体内表现为快速分布和消除,口服莪术油吸收较慢。
3色谱法在药物分析的研究动向
3.1多维色谱方法
为了从复杂样品中分离或定量某一特定成分,可采用两种或两种以上的不同的色谱方法,即采用二维或多维色谱,有着广泛的应用前景。
3.2联用技术
液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法,LC-MS-MS法测定血浆中HIV-1蛋白酶,准确高效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定,既节省材料又节约时间,已经应用于体液、血浆、血清中的药物分析。高效液相色谱-核磁共振联用在药物分析方面的作用很不错。
3.3微液相色谱的研究
微液相色谱分析所需的样品量及流动相的消耗大大下降,检测灵敏度又大大提高,相信此法在药物分析中也能发挥它的优点。
4高效液相色谱在中药分析中的应用前景
现阶段,HPLC技术己成为中国药典法定对一些中药标定活性成分检测的成熟的色谱分析方法,近年来已广泛用于中药药效学和药动学研究。高效液相色谱法必将在中药鉴定、中药活性成分分析、中药及其制剂生产的质量监控等方面起到重要的作用,成为分离、鉴定和含量测定的首选手段,有着广泛的应用前景。
参考文献
[1]金蕊.高效液相色谱-质谱联用技术在中药鉴定中的应用.生命科学仪器,2009,5:19-22.
[2]安爱军.高效液相色谱法及其在中药研究中的应用.中国新医药.2004,3(102).
[3]赵兴红.高效液相色谱技术(HPLC)在中药研究中的应用.中华临床医学卫生杂志.2006,1:34-35.
[4]吴恒.高效液相色谱在中药研究中的应用.安徽医药,2009,8.
关键词高效液相色谱;中药研究;应用进展
中图分类号R927文献标识码A文章编号1673-9671-(2010)071-0091-01
高效液相色谱技术(HPLC)是60年代末期,通过改进填料的粒度及柱压,在经典液相柱色谱的基础上引进气相色谱的理论与技术,并加以改进而发展起来的一种重要的分离分析方法,HPLC在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化分离机制,是靠被分离组分的分子与流动相分子争夺吸附表面活性中心的吸附能力差别而分离(可用吸附系数Ka衡量吸附能力的差异),是现代分离分析的重要手段。它具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全的优点,特别适合高沸点、大分子和热稳定性差的化合物的分离分析测试,在医药卫生、食品、环保等各个领域已得到了广泛的应用。尤其渗透到中药研究的各个领域,在中药的研究中发挥着越来越重要的作用。
1高效液相色谱法分离过程
试样被高效液相色谱法(HPLC)的流动相带入色谱柱并在柱中移动,试样中各组分在两相中发生溶解与解析、吸附与脱附、渗透与排阻,离子交换或亲和作用等,经过反复分配和平衡多次,由于各组分在固定相中的分配系数或溶解、吸附、交换、渗透及亲和能力等有差异,各组分在色谱柱中的滞留时间或将组分带出色谱柱所需流动相的体积(即保留值)也就不同,即它们在柱中向前移动的速度不同。随着流动相不断流过,组分在柱中两相间经过了反复多次的分配和平衡过程,当移动一定柱长以后,试样中各组分即可得到较完整的分离,顺序离开色谱柱进入检测器,产生的离子流信号经放大后,在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
2高效液相色谱技术在中药研究的发展近况
2.1中药质量控制
2.1.1中药有效成分和有效部位测定
中药质量的评价与控制是中药现代化研究的重要内容,测定其与功用有关活性成分的含量和活性部位是关键。中药有效成分的测定已成为评估中药质量的重要标志,实践经验证明,HPLC的适用范围较广,可用于分析高沸点、热不稳定性、大分子量的样品,是一种非常有效和普遍适用的中药有效成分的分析方法。采用HPLC技术,建立中药有效部位分析的方法,确保中药材及其制剂的质量和临床疗效等的研究和应用日益广泛。
2.1.2中药指纹图谱的确定
利用HPLC技术进行中药的标准化,建立药材或中成药特征的色谱或光谱的图谱是一种有效的方法。如在对中药山茱萸药材的括纹图谱的研究中,采用相关系数法计算不同样品指纹图谱之问相似度,结果表明指纹图谱相似度大小与药材品质有关。
2.1.3中药炮制方面的应用
研究炮制机理,探索炮制前后化学成分变化,合理制定炮制工艺是当前中药炮制研究和中药生产的重要环节。采用HPLC法测定干姜,姜皮,炮制姜中的辣味成分的姜酚含量,姜酚易受热发生逆羟醛缩合降升反应,在气相色谱分析中难以获得准确结果。HPLC法分离效果最好,在常温下操作,是测定姜酚等辣味成分的理想方法。
2.2中药药物动力学研究
2.2.1中药有效成分的药动学研究
高效液相色谱法具有高灵敏度和高专属性特点,以满足药物动力学研究中复杂介质中痕量成分准确定量的要求,自80年代用于中草药药代动力学研究以来,现已成为中药药代动力学研究的主要手段。
2.2.2药物代谢动力学的研究
实验者通过检测不同组织中药物的浓度来观察药物吸收、分布情况。厉将斌等利用HPLC技术研究前列栓给药途径选择的药动学依据,实验证明:灌胃与肛寨相比的相对生物利用度仅为26.07%和6.18%;前列腺组织药物浓度,经肛塞途径能测到部分1～2h时问点的小檗碱浓度,但不足以构成可分析的浓度一时问曲线,而灌胃途径则根本无法测到小檗碱浓度,两组间差异极显菩。经肛塞给药有以下优点:吸收速度快、血药浓度高、血药有效浓度维持时间长、靶器官前列腺组织内药物浓度相对较高,且药动学参数随兔不同而有较大的差异。游剑等应用HPLC研究莪术油的药动学,静注给药后吉玛酮在大鼠体内表现为快速分布和消除,口服莪术油吸收较慢。
3色谱法在药物分析的研究动向
3.1多维色谱方法
为了从复杂样品中分离或定量某一特定成分,可采用两种或两种以上的不同的色谱方法,即采用二维或多维色谱,有着广泛的应用前景。
3.2联用技术
液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法,LC-MS-MS法测定血浆中HIV-1蛋白酶,准确高效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定,既节省材料又节约时间,已经应用于体液、血浆、血清中的药物分析。高效液相色谱-核磁共振联用在药物分析方面的作用很不错。
3.3微液相色谱的研究
微液相色谱分析所需的样品量及流动相的消耗大大下降,检测灵敏度又大大提高,相信此法在药物分析中也能发挥它的优点。
4高效液相色谱在中药分析中的应用前景
现阶段,HPLC技术己成为中国药典法定对一些中药标定活性成分检测的成熟的色谱分析方法,近年来已广泛用于中药药效学和药动学研究。高效液相色谱法必将在中药鉴定、中药活性成分分析、中药及其制剂生产的质量监控等方面起到重要的作用,成为分离、鉴定和含量测定的首选手段,有着广泛的应用前景。
参考文献
[1]金蕊.高效液相色谱-质谱联用技术在中药鉴定中的应用.生命科学仪器,2009,5:19-22.
[2]安爱军.高效液相色谱法及其在中药研究中的应用.中国新医药.2004,3(102).
[3]赵兴红.高效液相色谱技术(HPLC)在中药研究中的应用.中华临床医学卫生杂志.2006,1:34-35.
[4]吴恒.高效液相色谱在中药研究中的应用.安徽医药,2009,8.