小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建

• 作 者: 王锁英 许化溪 王胜军 黄新祥 王文斌 陈巧林 马斌 眭建
• 机 构: 江苏大学附属医院儿科,江苏大学检验医学研究所,江苏大学生命科学院
• 出 处: 南京医科大学学报：自然科学版
• 发表日期: 2006年3期
• 关键词: T-BET RT-PCR 基因克隆 重组质粒 腺相关病毒载体 T-bet RT-PCR gene cloing recombinant plasmid AAV
• 基金项目: 国家自然科学基金资助（30471627）

目的：构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体。方法：利用RT-PCR方法，从Balb／C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA，经测序证实后插入Pzac2．1质粒。用磷酸钙沉淀法．与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞，包装成重组的病毒颗粒。并通过抽提病毒DNA进行PCR扩增鉴定重组病毒的形成．设立eGFP基因为对照。结果：1592bp的小鼠T-bet基因被成功克隆。分析表明．与Genbank中发表的序列相比具有99．8％的同源性。重组质粒Pzac2．