【摘 要】
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目的探讨多重耐药假单胞菌属细菌对碳青霉烯类和氨基糖苷类两类抗生素耐药的分子机制。方法2012年6月至2013年3月，海南省三亚市人民医院检验科收集到6株产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌，来自该医院4个不同的病区。VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪和16S rDNA扩增测序比对鉴定核实细菌种属。E-test法测定菌株对临床常用抗生素最低抑菌浓度。Carba NP法检测菌株是否产碳
【机 构】
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海南省三亚市人民医院中心实验室，三亚市 572000,中国疾病预防控制中心传染病预防控制所细菌耐药室传染病预防控制国家重点实验室，北京 102206,中国疾病预防控制中心传染病预防控制所细菌耐药室传染
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目的探讨多重耐药假单胞菌属细菌对碳青霉烯类和氨基糖苷类两类抗生素耐药的分子机制。
方法2012年6月至2013年3月，海南省三亚市人民医院检验科收集到6株产碳青霉烯酶铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌，来自该医院4个不同的病区。VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪和16S rDNA扩增测序比对鉴定核实细菌种属。E-test法测定菌株对临床常用抗生素最低抑菌浓度。Carba NP法检测菌株是否产碳青霉烯酶。PCR扩增和测序比对明确碳青霉烯酶和氨基糖苷类甲基化酶的基因亚型。PCR和重叠PCR（overlap PCR）扩增Ⅰ型整合子及重要耐药基因侧翼基因环境，测序并拼接PCR产物明确耐药基因座位排列。SpeI酶切后脉冲场凝胶电泳（SpeI-PFGE）判断菌株之间亲缘关系，S1酶切后脉冲场凝胶电泳（S1-PFGE）进一步明确菌株间携带质粒的大小及其关联。
结果6株耐碳青霉烯类抗生素的假单胞菌属细菌，其中有3株为恶臭假单胞菌，3株为铜绿假单胞菌，且均为Carba NP试验阳性，产B组碳青霉烯酶。PCR进一步确证携带blaIMP-45，介导对除氨曲南外所有的β-内酰胺类药物耐药，且同时携带16s rRNA甲基化酶armA基因，介导对所有的氨基糖苷类药物耐药。基因环境的研究显示blaIMP-45和armA共同定位于Tn1548相关区域。SpeI-PFGE电泳表明除2株铜绿假单胞菌外，其他菌株彼此之间都不是近缘的克隆。S1-PFGE电泳结果表明这些菌株都携带大质粒（300~600 kb），质粒的大小并不完全一致。
结论在我院内检出同时携带blaIMP-45和armA的铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌，这些耐药基因在不同菌株之间的播散可能涉及质粒的接合转移及含耐药基因的可移动元件在不同种间的水平转移。
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