论文部分内容阅读
摘要：目的 优选产妇康颗粒醇提工艺。方法 采用正交试验设计，以高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定黄芪甲苷的含量，以高效液相色谱法测定芍药苷的含量，结合浸出物含量，考察乙醇浓度、提取次数、提取时间，优选最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为加6倍量80%乙醇，提取2次，每次1 h。结论 本试验优化后的工艺合理、稳定、可行，适于产妇康颗粒的提取。
关键词：产妇康颗粒；黄芪甲苷；芍药苷；提取工艺；正交试验
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）08-0050-02
产妇康是本院治疗产后出血的临床验方，由黄芪、当归、赤芍、益母草、桃仁、炮姜、莱菔子、木香、炙甘草等多味药物组成，具有益气养血、理气化瘀、健脾和胃的作用。原方以汤剂形式用于临床多年，疗效确切，但汤剂存在服用剂量大，使用、携带不方便等缺点，故结合本方日服剂量、临床用药要求，将其制成颗粒剂，并应用环糊精包合、喷雾干燥等技术确保颗粒剂的有效性、安全性、稳定性。本试验采用正交设计，以芍药苷、黄芪甲苷的转移率及浸出物含量为考察指标，优选其最佳提取条件。
1 仪器与试药
DIONEX高效液相色谱仪（DIONEX P-600泵，TCC-100柱温箱，PDA-100检测器），电子分析天平（SARTORIUS BP-210S）， KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
芍药苷对照品（批号110736-200630）、黄芪甲苷对照品（批号110781-200613），中国药品生物制品检定所提供；黄芪、赤芍等药材购自河南中原正信药材有限责任公司，经河南中医学院陈随清教授鉴定符合《中华人民共和国药典》要求；甲醇、乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 黄芪甲苷含量测定
2.1.1 色谱条件与系统适应性试验 依利特C18（250 mm×4.6 mm， 5 ?m），蒸发光散射检测器Alltech ELSD-2000ES，以乙腈-水（33∶67）为流动相，漂移管温度101.2 ℃，载气流速2.7 L/min，柱温30 ℃，流速1 mL/min，理论塔板数按黄芪甲苷峰计不低于4 000。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.505 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 精密吸取提取浓缩液20 mL（相当于黄芪药材3 g），水浴蒸干，残渣加水10 mL，微热使溶，用水饱和的正丁醇振摇萃取4次，每次40 mL，合并正丁醇层，用氨试液洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇层水浴蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液[1-3]。
2.1.4 阴性对照品溶液的制备 精密吸取未加黄芪的提取浓缩液20 mL，同供试品溶液制备方法，制备阴性对照品溶液。
2.1.5 专属性试验 分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10 ?L、黄芪供试品溶液20 ?L、阴性对照品溶液20 ?L，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1）。可见，此法用于测定提取液中黄芪甲苷的含量具有较好的专属性。
2.1.6 测定法 分别精密吸取对照品溶液10 ?L、供试品溶液各20 ?L，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2 芍药苷含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 依利特C18（250 mm×4.6 mm， 5 ?m）；流动相甲醇-水（30∶70）；检测波长230 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于3 000[4-5]。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含芍药苷0.5 mg的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取提取浓缩液10 mL（相当于赤芍药材1.5 g），水浴蒸干，用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 阴性对照品溶液的制备 精密吸取未加赤芍的提取浓缩液10 mL，同供试品溶液制备方法，制备阴性对照品溶液。
2.2.5 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液10 ?L、供试品溶液3 ?L、阴性对照品溶液3 ?L，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图2）。可见，此法用于测定提取液中芍药苷的含量具有较好的专属性。
2.2.6 测定法 分别精密吸取对照品溶液6 ?L、供试品溶液3 ?L，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3 样品中浸膏得率测定方法
精密吸取样品液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，至干燥器中冷却30 min，迅速精密称定质量，计算干浸膏得率。
2.4 正交试验设计方法优选提取条件
3 讨论
由于本处方含药味较多，若仅采用煎煮方法提取，则剂量过大，不利于患者服用。为此，试验中采用水蒸气蒸馏、煎煮、醇提等多种浸提方法，以利于有效物质提取。
根据预试验及查阅文献，方中黄芪、赤芍等药味的有效成分均在适宜浓度乙醇中溶解性较好，故将该部分药物醇提。方中黄芪为君药、赤芍为臣药且有效成分明确，故以提取液中黄芪甲苷、芍药苷转移率为考察指标，同时考虑中药多成分的特性，增加出膏率，进行加权评分，以保证结果的可靠性。
我们采用该工艺制备产妇康颗粒，并进行产妇康颗粒的抗炎、镇痛及促进子宫收缩活动等实验研究。结果表明，产妇康颗粒在抗炎、镇痛及促进子宫收缩方面具有良好作用[6]，为该药的临床研究提供了依据。
参考文献：
[1] 赵晓晓，孙丽娟，蔡宇.正交试验优选黄芪主要有效成分的提取工艺[J].中国中医药信息杂志，2011，18（11）：59-61.
[2] 任密莎，黄志红.消糖复康胶囊中黄芪甲苷含量测定的研究[J].现代医药卫生，2007，23（6）：808-810.
[3] 陆益，黎远东，梁宁生，等.高效液相色谱法测定复方华蟾胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中国医院药学杂志，2007，27（12）：1773-1774.
[4] 王瑞，展晓日，刘真玮，等.HPLC测定白芍配伍前后芍药苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2011，18（8）：57-59.
[5] 徐丽华，文红梅.赤芍中芍药苷含量测定方法研究[J].中药材，2001， 24（5）：346-347.
[6] 张丽霞，李翠萍，黄霞，等.产妇康颗粒抗炎、镇痛及对大鼠在体子宫收缩活动影响的实验研究[J].中医研究，2008，21（5）：9-10.
（收稿日期：2011-12-28，编辑：陈静）
关键词：产妇康颗粒；黄芪甲苷；芍药苷；提取工艺；正交试验
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）08-0050-02
产妇康是本院治疗产后出血的临床验方，由黄芪、当归、赤芍、益母草、桃仁、炮姜、莱菔子、木香、炙甘草等多味药物组成，具有益气养血、理气化瘀、健脾和胃的作用。原方以汤剂形式用于临床多年，疗效确切，但汤剂存在服用剂量大，使用、携带不方便等缺点，故结合本方日服剂量、临床用药要求，将其制成颗粒剂，并应用环糊精包合、喷雾干燥等技术确保颗粒剂的有效性、安全性、稳定性。本试验采用正交设计，以芍药苷、黄芪甲苷的转移率及浸出物含量为考察指标，优选其最佳提取条件。
1 仪器与试药
DIONEX高效液相色谱仪（DIONEX P-600泵，TCC-100柱温箱，PDA-100检测器），电子分析天平（SARTORIUS BP-210S）， KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
芍药苷对照品（批号110736-200630）、黄芪甲苷对照品（批号110781-200613），中国药品生物制品检定所提供；黄芪、赤芍等药材购自河南中原正信药材有限责任公司，经河南中医学院陈随清教授鉴定符合《中华人民共和国药典》要求；甲醇、乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 黄芪甲苷含量测定
2.1.1 色谱条件与系统适应性试验 依利特C18（250 mm×4.6 mm， 5 ?m），蒸发光散射检测器Alltech ELSD-2000ES，以乙腈-水（33∶67）为流动相，漂移管温度101.2 ℃，载气流速2.7 L/min，柱温30 ℃，流速1 mL/min，理论塔板数按黄芪甲苷峰计不低于4 000。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.505 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 精密吸取提取浓缩液20 mL（相当于黄芪药材3 g），水浴蒸干，残渣加水10 mL，微热使溶，用水饱和的正丁醇振摇萃取4次，每次40 mL，合并正丁醇层，用氨试液洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇层水浴蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液[1-3]。
2.1.4 阴性对照品溶液的制备 精密吸取未加黄芪的提取浓缩液20 mL，同供试品溶液制备方法，制备阴性对照品溶液。
2.1.5 专属性试验 分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10 ?L、黄芪供试品溶液20 ?L、阴性对照品溶液20 ?L，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1）。可见，此法用于测定提取液中黄芪甲苷的含量具有较好的专属性。
2.1.6 测定法 分别精密吸取对照品溶液10 ?L、供试品溶液各20 ?L，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2 芍药苷含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 依利特C18（250 mm×4.6 mm， 5 ?m）；流动相甲醇-水（30∶70）；检测波长230 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于3 000[4-5]。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含芍药苷0.5 mg的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取提取浓缩液10 mL（相当于赤芍药材1.5 g），水浴蒸干，用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.2.4 阴性对照品溶液的制备 精密吸取未加赤芍的提取浓缩液10 mL，同供试品溶液制备方法，制备阴性对照品溶液。
2.2.5 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液10 ?L、供试品溶液3 ?L、阴性对照品溶液3 ?L，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图2）。可见，此法用于测定提取液中芍药苷的含量具有较好的专属性。
2.2.6 测定法 分别精密吸取对照品溶液6 ?L、供试品溶液3 ?L，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3 样品中浸膏得率测定方法
精密吸取样品液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，至干燥器中冷却30 min，迅速精密称定质量，计算干浸膏得率。
2.4 正交试验设计方法优选提取条件
3 讨论
由于本处方含药味较多，若仅采用煎煮方法提取，则剂量过大，不利于患者服用。为此，试验中采用水蒸气蒸馏、煎煮、醇提等多种浸提方法，以利于有效物质提取。
根据预试验及查阅文献，方中黄芪、赤芍等药味的有效成分均在适宜浓度乙醇中溶解性较好，故将该部分药物醇提。方中黄芪为君药、赤芍为臣药且有效成分明确，故以提取液中黄芪甲苷、芍药苷转移率为考察指标，同时考虑中药多成分的特性，增加出膏率，进行加权评分，以保证结果的可靠性。
我们采用该工艺制备产妇康颗粒，并进行产妇康颗粒的抗炎、镇痛及促进子宫收缩活动等实验研究。结果表明，产妇康颗粒在抗炎、镇痛及促进子宫收缩方面具有良好作用[6]，为该药的临床研究提供了依据。
参考文献：
[1] 赵晓晓，孙丽娟，蔡宇.正交试验优选黄芪主要有效成分的提取工艺[J].中国中医药信息杂志，2011，18（11）：59-61.
[2] 任密莎，黄志红.消糖复康胶囊中黄芪甲苷含量测定的研究[J].现代医药卫生，2007，23（6）：808-810.
[3] 陆益，黎远东，梁宁生，等.高效液相色谱法测定复方华蟾胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中国医院药学杂志，2007，27（12）：1773-1774.
[4] 王瑞，展晓日，刘真玮，等.HPLC测定白芍配伍前后芍药苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2011，18（8）：57-59.
[5] 徐丽华，文红梅.赤芍中芍药苷含量测定方法研究[J].中药材，2001， 24（5）：346-347.
[6] 张丽霞，李翠萍，黄霞，等.产妇康颗粒抗炎、镇痛及对大鼠在体子宫收缩活动影响的实验研究[J].中医研究，2008，21（5）：9-10.
（收稿日期：2011-12-28，编辑：陈静）