巴斯德梭菌甘油脱水酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质的研究

• 作 者: 唐悦 孟晓蕾 齐向辉 韦宇拓 黄日波
• 机 构: 广西大学生命科学与技术学院,南宁中诺生物工程公司
• 出 处: 精细化工
• 发表日期: 2006年11期
• 关键词: 甘油脱水酶 基因表达 重组酶纯化 酶学性质 glycerol dehydratase gene expression purification chara
• 基金项目: 国家“863”高技术研究与发展计划项目资助项目（No.2003AA001039）

用聚合酶链反应（PCR）技术，从巴斯德梭菌（Clostridium pasteurianum）扩增出甘油脱水酶基因（dhaBCE），在大肠杆菌中高效表达，SDS—PAGE（聚丙烯酰胺凝胶）电泳结果显示，分别有相对分子质量为66、21、16kD三条特异性蛋白表达条带。用金属镍亲和层析及S-300H凝胶层析将重组蛋白进行分离纯化，所得纯酶的比活为4·26U／mg。重组酶的最适反应温度42～44℃，最适作用pH=9．10～9．50，它对三个底物结构类似物的米氏常数（Km）值分别是：1，2-丙二醇0．3