【摘 要】
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目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(P13K)/丝氨酸府氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在二氧化硅(SiO2)粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞(HBE)表达转化生长因子(TGF)-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)中的作用。方法将体外培养的HBE细胞分成5组:(1)空白对照组;(2)SiO2处理组;(3)Akt磷酸化抑制剂组;(4)同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组;(5)Akt磷酸化抑制剂处理细胞2
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院职业医学与环境卫生学系,210029,南京医科大学公共卫生学院职业医学与环境卫生学系,210029,南京医科大学公共卫生学院职业医学与环境卫生学系,210029,南京医科大学公
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目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(P13K)/丝氨酸府氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在二氧化硅(SiO2)粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞(HBE)表达转化生长因子(TGF)-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)中的作用。方法将体外培养的HBE细胞分成5组:(1)空白对照组;(2)SiO2处理组;(3)Akt磷酸化抑制剂组;(4)同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组;(5)Akt磷酸化抑制剂处理细胞24h再用SiO2处理组;SiO2暴露浓度为100μg/ml,磷酸化抑制剂Ly294002浓度为10μmol/L;用蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、TGF-β、α-SMA表达水平。用免疫荧光技术检测上述处理过程中α-SMA蛋白在细胞中的定位和表达情况。结果SiO2可以明显促使Akt磷酸化,48hp-Akt表达增加了近1倍,72h表达最高;TGF-β在12h明显增高,48h达高峰;α-SMA表达在24h开始增高,72h表达上调了1倍。Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制Akt的磷酸化,明显降低α-SMA的表达,尤其是先加抑制剂与细胞作用24h后再加SiO2,p-Akt和α-SMA表达均明显下调,分别下调了1.5倍和7.6倍,对TGF-β表达则无明显影响。免疫荧光结果显示,SiO2可明显诱导HBE细胞内α-SMA的表达,而Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以使HBE细胞内α-SMA蛋白的荧光强度明显减弱。结论SiO2诱导HBE细胞表达α-SMA可能是通过P13K/Akt信号通路实现的,Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制SiO2诱导的α-SMA表达。
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