【摘 要】
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目的 设计并化学合成针对ski 的siRNA 分子片段,转染人视网膜色素上皮(hRPE)细胞抑制ski 表达,观察其对hRPE 细胞增生和迁移等生物学功能方面的影响.方法 设计并化学合成3 对
【机 构】
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210002南京,解放军八一医院眼科青岛解放军第401医院崂山分院眼科重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所
【出 处】
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2014年中国眼底病论坛暨全国眼底病专题学术研讨会
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目的 设计并化学合成针对ski 的siRNA 分子片段,转染人视网膜色素上皮(hRPE)细胞抑制ski 表达,观察其对hRPE 细胞增生和迁移等生物学功能方面的影响.方法 设计并化学合成3 对针对人ski mRNA(NM_003036)中910、1912 和389 靶位的siRNAs,以脂质体方法转染hRPE 细胞,运用RT-PCR 法和Western 印迹法检测细胞中ski 基因在mRNA 水平和蛋白水平的变化.然后利用MTT 法和Transwell 模型检测转染ski-siRNA 的hRPE 细胞增生活力和迁移能力等生物学功能方面指标的变化.结果 RT-PCR 和Western 印迹检测结果证实3 条ski-siRNA 转染48 h 后,均不同程度降低了hRPE 细胞中ski 基因的mRNA 和蛋白表达水平(P＜0.05),其中siRNA-C 的干扰效果最强,与阴性对照相比抑制率达到45 ％左右,被用于后续生物学功能实验的转染.转染ski-siRNA 后2～6 d hRPE 细胞的增生能力明显受到抑制(P＜0.05).与空白对照组和NC 组相比,在培养12h 和24h 时,siRNA-C 转染hRPE 细胞迁移数量明显升高(P＜0.01).结论 siRNA-C (389) 是可以高效、特异地沉默hRPE 细胞中ski 基因.靶向ski 基因的siRNA 转染可以有效地抑制hRPE 细胞增生,但可能促进细胞迁移.ski 对hRPE 增生和迁移调控可能是PVR 治疗的一个新的方向.
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