基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究柴芍六君子汤对海马神经元自噬的影响

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目的:从磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬信号通路出发,探讨柴芍六君子汤抗应激损伤的作用机制.方法:采用皮质酮建立体外慢性应激细胞模型,利用CCK-8、qRT-PCR检测神经元生存率以及LC3、p62、mTOR自噬相关基因表达,且筛选出柴芍六君子汤血清最佳的工作浓度;采用Western Blot检测不同柴芍六君子(以下简称柴芍)血清浓度(10%、20%、30%)/自噬抑制剂3-MA及自噬激动剂雷帕霉素对Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、ULK1、p62及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的影响.结果:当柴芍血清为20%时,神经元生存率及LC3、p62、mTOR自噬相关基因表达改善最为明显.与20%空白血清组比较,20%柴芍血清组神经元生存率增加(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、ULK1蛋白表达降低(P<0.01),PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-4E-BP1蛋白表达升高(P<0.01);20%空白血清+3-MA组神经元生存率增加(P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、ULK1蛋白表达降低(P<0.01);20%空白血清+雷帕霉素组神经元生存率减少(P<0.01),p-Akt、p-mTOR、p-4E-BP1蛋白表达降低(P<0.01).结论:柴芍六君子汤通过激活PI3K/Akt/mTOR通路,从而抑制皮质酮损伤的海马神经元过度自噬.
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