重组pAd／CMV／V5-DEST-p16载体的构建及其对人肝癌细胞的抑制作用

• 作 者: 姚彬 胡勇 熊自忠 李旭
• 机 构: 安徽医科大学第一附属医院感染病科,安徽医科大学基础医学院微生物教研室
• 出 处: 安徽医药
• 发表日期: 2006年11期
• 关键词: 重组腺病毒 P16基因 通路克隆系统 基因治疗 recombinant adenovirus pl6 gene gateway-cloning syste
• 基金项目: 安徽省自然科学基金资助项目（No000-44322）

目的 构建pAd／CMV／V5-DEST-p16重组腺病毒载体，并观察野生型p16基因对人肝癌细胞SMMC7721株的抑制作用。方法 合成人p16-INK4表达基因。构建pENTR1A．p16质粒。通过LR反应，入口克隆pENTR1A-p16质粒的外源性合成的修饰后的p16cDNA，取代目的载体pAd／CMV／V5-DEST中的ccdB基因，形成表达克隆pAd／CMV／V5-DEST-p16。测序证实质粒含有目的基因。PacI酶切后的重组腺病毒载体，通过脂质体2000介导，转染293A细胞，产生缺陷性的重