靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建

• 作 者: 王全师 王欣璐 李华 王巧愚 王全颖 杨广笑
• 机 构: 南方医科大学南方医院PET中心,广州军区广州总医院核医学科PET中心,中山大学附属第三医院,西安华广生物工程公司
• 出 处: 南方医科大学学报
• 发表日期: 2006年12期
• 关键词: RNA干扰 逆转录病毒载体 人端粒酶逆转录酶 RNA interference retroviral vector human telomerase rever
• 基金项目: 国家自然科学基金（30370426,30500136）,广东省科技计划项目（2003C32729）,广东省自然科学基金（06021352）

目的构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体。方法采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列，随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆入真核表达载体pLXSN中，并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定。以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况。以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果：结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒