γ-氨基丁酸抑制胆管癌细胞生长的机制

• 作 者: 王成 黄强 朱成林 刘臣海 谢放 黄朝君 王伟
• 机 构: 230001 合肥，安徽医科大学附属省立医院普外科胆胰病区 肝胆胰外科安徽省重点实验室,230001 合肥，安徽医科大学附属省立医院普外科胆胰病区 肝胆胰外科安徽省重点实验室,230001 合肥，安徽
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2016年33期
• 关键词: 胆管肿瘤 γ-氨基丁酸 环磷酸腺苷 蛋白激酶A 细胞外调节蛋白激酶

目的

探讨γ-氨基丁酸(GABA)通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A (cAMP/PKA)通路抑制胆管癌细胞株QBC939生长的分子机制。

方法

分别以GABA、GABA＋环磷酸腺苷(cAMP)激动剂(8Br)、GABA＋蛋白激酶A(PKA)拮抗剂(H89)孵育胆管癌细胞株QBC939 48 h，采用噻唑蓝(MTT)法及膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测cAMP、PKA表达，Western blot法检测蛋白激酶AⅠ(PKAⅠ)、蛋白激酶AⅡ(PKAⅡ)及细胞外调节蛋白激酶(ERK)表达。构建人胆管癌裸鼠皮下种植瘤模型，随机分为对照组和GABA治疗组，用药5周后观察肿瘤体积，Western blot法检测种植瘤PKAⅠ、PKAⅡ及ERK的表达。

结果

MTT及流式细胞术检测结果显示8Br协同GABA所导致的增殖抑制和凋亡效应，而H89拮抗此效应；ELISA检测结果显示GABA明显上调cAMP及PKA的含量，8Br协同GABA增加cAMP含量，H89拮抗GABA所导致PKA的含量；Western blot检测结果显示，GABA较对照组能明显下调PKAⅠ(0.087 8±0.003 0比0.152 1±0.003 0，t＝29.687，P<0.05)，上调PKAⅡ(0.204 2±0.012 0比0.146 1±0.072 0，t＝8.152，P<0.05) 蛋白的表达，且下调ERK蛋白的表达(0.368 3±0.007 0比0.468 7±0.010 0，t＝13.647，P<0.05)；与对照组比较，治疗组的种植瘤体积明显缩小[(0.500±0.020) cm³比(0.320±0.030) cm³，t＝15.354，P<0.05]，PAKⅠ、ERK蛋白表达下降，PKAⅡ表达上升。

结论

GABA抑制胆管癌细胞株QBC939生长可能由cAMP/PKA信号通路介导，通过下调PKAⅠ及上调PKAⅡ的表达发挥调控作用，而下调ERK蛋白的表达可能发挥抗肿瘤作用。