结核分枝杆菌Rv0577基因在毕赤酵母的表达及重组抗原活性鉴定

• 作 者: 邓艳琴 王加熊 肖方震 何似 王灵岚 严延生
• 机 构: 福建省疾病预防控制中心,福建医科大学
• 出 处: 中国人兽共患病学报
• 发表日期: 2008年11期
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv0577 毕赤酵母 基因表达 抗原性 Mycobacterium tuberculosis Rv0577 gene Pichia pasto

目的在毕赤酵母表达结核分枝杆菌Rv0577基因并鉴定重组蛋白抗原活性。方法从结核分枝杆菌标准株H37Rv扩增Rv0577基因,TA克隆进入pGEM-TEasy载体,再亚克隆进入pPICZαA。重组质粒pPICZαA-Rv0577经双酶切鉴定并测序证实,线性化后电转化导入毕赤酵母X-33表达;采用Western blot和Dot blot鉴定抗原活性。结果双酶切及测序鉴定均证实获得Rv0577基因的正确克隆。pPICZαA-Rv0577在X-33分泌表达的目的蛋白,通过硫酸铵沉淀、HPLC顺序纯化,获得的