论文部分内容阅读
目的:观察胰岛素样生长因子Ⅰ对藻酸盐凝胶三维培养条件下兔关节软骨细胞表型的影响.方法:实验于2004-10/2006-10在上海长海医院血管外科实验室完成.实验材料:4周龄雄性新西兰兔6只.实验方法:利用机械与酶消化的方法获得均一的兔关节软骨细胞,在单层培养条件下将软骨细胞增殖至P2代:将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质,进行三维培养.细胞培养分组:①不含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养.②含50μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组.③单层培养.实验评估:①三维培养细胞于培养的2,4,6周行冰冻切片苏木精-伊红染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测.②单层培养细胞每传代1次行细胞爬片苏木精-伊红染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测.结果:①细胞学外观形态变化:两组藻酸盐凝胶三维培养体系中的软骨细胞在6周的培养过程中始终保持了圆形的细胞外观.单层培养软骨细胞在第5代以前,均保持了星形及多角形的正常软骨细胞外观.②免疫组织化学显示结果:培养6周后,含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养软骨细胞特异性Ⅱ型胶原细胞仍呈强阳性染色,表达水平较转入三维体系前未见降低,培养细胞保持了良好的分化表型.单层培养软骨细胞在第5代以前,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色为阳性.第6代以后,大部分细胞呈梭形,向成纤维细胞转化,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色为阴性.结论:胰岛素样生长因子Ⅰ对藻酸盐三维培养条件下的关节软骨细胞表型具有维持作用.