【摘 要】
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为筛选芒果细菌性角斑病菌在侵染芒果叶片过程中稳定表达的内参基因,采用实时荧光定量聚合酶链式扩增反应技术检测和分析病原细菌的16S rRNA、gyrB、GAPDH、danK和rpoD这5个看家基因的表达量.结果 表明,经过PCR扩增效率筛选,5个基因均扩增出单一条带,且条带大小与预期产物相符,特异性较好,符合基本稳定性要求.利用geNorm软件分析发现,GAPDH和rpoD稳定性最高,M值均为0.122.其余3个基因的表达稳定性依次为gyrB (M=0.17)＞danK (M=0.325)＞ 16S rRN
【机 构】
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中国热带农业科学院南亚热带作物研究所,海南省热带园艺产品采后生理与保鲜重点实验室,农业部热带果树生物学重点实验室,湛江,524091
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为筛选芒果细菌性角斑病菌在侵染芒果叶片过程中稳定表达的内参基因,采用实时荧光定量聚合酶链式扩增反应技术检测和分析病原细菌的16S rRNA、gyrB、GAPDH、danK和rpoD这5个看家基因的表达量.结果 表明,经过PCR扩增效率筛选,5个基因均扩增出单一条带,且条带大小与预期产物相符,特异性较好,符合基本稳定性要求.利用geNorm软件分析发现,GAPDH和rpoD稳定性最高,M值均为0.122.其余3个基因的表达稳定性依次为gyrB (M=0.17)＞danK (M=0.325)＞ 16S rRNA (M=0.542).在5个候选内参基因中,GAPDH和gyrB为病原细菌侵染芒果叶片下表达最稳定的基因,且不需要引入第三个基因(V2/3=0.063).NormFinder软件分析5个候选内参基因稳定性数值顺序依次为:gyrB(0.092) ＞danK (0.169) ＞GAPDH(0.188) ＞rpoD (0.235)＞16S rRNA (0.581).Bestkeeper程序分析5个候选内参基因的标准差(SD)值都在0.86～0.79之间.综合以上结果发现GAPDH和gyrB基因的表达稳定性最好,能够作为病原细菌在侵染芒果叶片时的内参基因,更准确地校正定量结果.
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