人源ADAM17基因干扰表达载体的构建与鉴定

• 作 者: 张春利 蔡徐山 宦宇 齐结华 王晓青 王东江
• 机 构: 上海市嘉定区妇幼保健院检验科
• 出 处: 国际检验医学杂志
• 发表日期: 2019年9期
• 关键词: 靶向人去整合素-金属蛋白酶17基因 短发夹RNA 载体构建 human disintegrin domain and metalloproteinase17sh
• 基金项目: 上海市嘉定区卫计委基金资助项目(2017-QN-06)

目的构建靶向人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人胰腺癌细胞株(PANC1)中鉴定其干扰效率。方法设计并合成ADAM17基因的shRNA片段,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ消化过的pLKO.1-puro载体中,构建干扰表达载体pLKO.1-puroADAM17shRNA,测序鉴定;用干扰载体pLKO.1-puroADAM17shRNA转染PANC1细胞,荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)和Westernblot法检测干扰质粒的干扰效率;CCK-8法检测其