【摘 要】
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目的改良并建立小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)原代培养方法,探讨低氧条件对其增殖、迁移及凋亡的影响。方法无菌条件下分离肺动脉,胰蛋白酶酶解组织贴块法体外培养PASMC。倒置
【基金项目】
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国家自然科学基金(81470381,81770262);江苏省科技厅社会发展重点研发计划(BE2015663);扬州大学研究生国际学术交流专项基金项目(2018年度)
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目的改良并建立小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)原代培养方法,探讨低氧条件对其增殖、迁移及凋亡的影响。方法无菌条件下分离肺动脉,胰蛋白酶酶解组织贴块法体外培养PASMC。倒置相差显微镜观察细胞形态、细胞计数法绘制细胞生长曲线;采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色法鉴定细胞类型及纯度;运用CCK-8法检测不同氧含量对细胞增殖活力的影响,在低氧条件下,划痕实验检测细胞迁移能力, Western blot法检测细胞BAX蛋白水平。结果培养的原代PASMC呈长梭形,具有典型的"峰-谷"状, 9 d后细胞生长迅速呈单层致密排列,细胞生长曲线近似"S"形;α-SMA阳性的细胞可达96%。与常氧组相比,缺氧组在各时间点的PASMC增殖活性和迁移距离均明显增加,在10 mL/L氧含量条件下细胞增殖和迁移活力最强,细胞BAX蛋白水平也明显降低,且具有时间依赖性。结论采用酶解组织贴块法可获取高纯度高活力的原代PASMC,在10 mL/L氧含量条件下细胞增殖和迁移活力强,不易凋亡。
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