玉米C₄型PPDK基因的分段PCR克隆及其表达载体构建

• 作 者: 崔震海 王雷 阮燕晔 张立军 朱延姝 樊金娟
• 机 构: 沈阳农业大学生物技术学院/辽宁省植物基因工程技术研究中心
• 出 处: 沈阳农业大学学报
• 发表日期: 2014年6期
• 关键词: 玉米 PPDK 分段PCR 克隆 In-Fusion技术 表达载体构建 maize PPDK segmented-PCR cloning In-Fusi
• 基金项目: 国家自然科学基金项目(31000673,31370283),教育部博士点基金项目(20102103110001,20102103120001),辽宁省科技厅科技攻关项目(2014208001),中国博士后基金面上项目(2014M561097)

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物和景天科酸代谢(CAM)植物光合作用的关键酶,催化形成固定CO2的初始分子受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)。玉米的C4型PPDK基因序列较长,难以直接克隆。本研究设计多对引物,首先利用常规PCR扩增PPDK启动子,再利用分段PCR扩增PPDK基因全长编码序列;测序证实克隆序列正确无误,最后利用In-Fusion技术将各个片段定向克隆至载体p CAMBIA-1391Z,成功构建了玉米C4型PPDK基因的植物表达载体。最终为C4型PPDK基因功能研究和C3植物遗传转化提供可