CD4+CD25-T淋巴细胞转化为CD4-CD8-调节T细胞的体外实验研究

• 作 者: 苏万春 冷希圣 张栋 高鹏骥 朱继业
• 机 构: 100044北京大学人民医院肝胆外科中心北京大学器官移植中心,100044北京大学人民医院肝胆外科中心北京大学器官移植中心,首都医科大学附属北京友谊医院实验中心,100044北京大学人民医院肝胆外科中
• 出 处: 中华普通外科杂志
• 发表日期: 2012年27期
• 关键词: T淋巴细胞 调节性 树突细胞 细胞培养技术

目的 探讨体外诱导和纯化CD4+ CD25-T淋巴细胞(effector T cell,Teff)转化为CD4-CD8-双阴性调节T细胞(double negative regulatory T cell,DN Treg)的最适条件.方法 采用免疫磁珠分选方法提取C57BL/6小鼠的CD4+ CD25-T淋巴细胞、DBA/2小鼠的成熟树突状细胞共培养,加入不同剂量的IL-2,通过流式细胞检测CD4-CD8-T细胞的转化比例并确定最适条件,免疫磁珠阴性选择分选提纯转化的CD3+ CI4-CD8-T细胞,流式细胞仪检测转化的CD4-CD8-调节T细胞对CD4+ CD25-效应T细胞增殖抑制情况.结果 CD4+ CD25-T淋巴细胞与DBA/2小鼠的树突状细胞共培养6d后检测CD4-CD8-调节T细胞的转化比率为6.21％ ±2.03％,实验组加入不同浓度IL-2的转化率:A组(25 ng/ml)为14.77％±2.15％,B组(50 ng/ml)为21.29％±2.68％,C组(75 ng/ml)为43.45％ ±4.45％,D组(100 ng/ml)为28.59％±3.05％,IL-2浓度在75 ng/ml时,转化获得率最高(C组与对照组、实验A、B、D组比较分别t=10.700,8.288,6.158,3.932,均P＜0.05)；分离提纯CD4-CD8-双阴性调节细胞纯度达到98.10％,CD4-CD8-双阴性调节细胞与CFSE染色的CD4+ CD25-T淋巴细胞、小鼠树突状细胞共培养6d,实验组增殖指数为1.15明显低于对照组2.07.结论 小鼠CD4+ CW25-T淋巴细胞在体外,成熟树突状细胞刺激下可转化为CD4-CD8-双阴性调节T细胞,IL-2可显著提高其转化率。