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超声波协同固定化脂肪酶催化制备生物柴油的最佳工艺条件为：超声波功率70W、叔丁醇为反应介质、叔丁醇用量3％（v／v）、醇油比3：1且甲醇分三批加入、反应温度40℃、水含量为2％（v／v）。副产物甘油对固定化脂肪酶使用寿命影响最大，使用后的固定化脂肪酶用丙酮洗去表面的甘油，进行酯交换反应，酶的稳定性大为提高，可连续使用16批次。