线粒体细胞色素C氧化酶RNAi慢病毒载体的构建

• 作 者: 陈艳 邵建永 吴秋良 江高峰 夏云飞 陈忠平
• 机 构: 中山大学肿瘤防治中心病理科,中山大学肿瘤防治中心实验研究部
• 出 处: 中国病理生理杂志
• 发表日期: 2005年6期
• 关键词: 基因 线粒体 重组 慢病毒属 载体 细胞色素C氧化酶 Genes Mitochondria Recombinant Lentivirus Vectors

目的:通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础. 方法: 根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,插入到pENTR/U6质粒缺口末端,连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体;通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest 载体上,构建含U6启动子、靶序列和Pol Ⅲ终止子表达框的MTCOX-I shRNA表达重组体;经脂质体导入29