甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建

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为了克隆甜菜单体附加系M14元融合生殖相关基因,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA,分离纯化mRNA,以Oligo(dT)为引物,在逆转录酶的作用下,合成第一链cDNA,进而合成第二链cDNA。含有EcoRⅠ和NotⅠ粘性末端的双链cDNA在L4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连,并对连接产物进行体外包装,得到噬菌体颗粒,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库。经大肠杆菌寄主菌株xLI
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