【摘 要】
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目的 研究反转录病毒介导的绿色荧光蛋白(EGFP)基因和酪氨酸羟化酶(TH)基因在原代培养的骨髓基质细胞(bMSCs)中的表达情况.方法 体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs,原代培养8～10
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);北京市自然科学基金
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目的 研究反转录病毒介导的绿色荧光蛋白(EGFP)基因和酪氨酸羟化酶(TH)基因在原代培养的骨髓基质细胞(bMSCs)中的表达情况.方法 体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs,原代培养8～10 d后, 同时利用含EGFP和TH基因的反转录病毒上清依次转染bMSCs并进行抗性筛选,7～10 d可得到稳定表达EGFP的bMSCs,在稳定转染EGFP后10 d进行TH病毒上清的转染,7～10 d可得到稳定表达TH和EGFP的bMSCs.结果 原代培养bMSCs 3～4 d后生长至70%～80%汇合,病毒转染EGFP后第2天,细胞呈现弱荧光,经G418筛选2～3 d后出现阳性细胞,约8～10 d生长融合,阳性率60%～70%,第2～5代阳性细胞比率无明显变化.TH阳性率也达60%以上.结论 利用反转录病毒载体可有效地将EGFP和TH基因转至bMSCs中,并能在体外稳定表达传代.这种表达EGFP和TH的bMSCs对于研究bMSCs的体内迁移分化及帕金森病(PD)的基因治疗具有重要意义.
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