猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

• 作 者: 李志杰 提金凤 李舫 王志远 刁玉荣
• 机 构: 山东畜牧兽医职业学院
• 出 处: 中国预防兽医学报
• 发表日期: 2018年1期
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合症病毒 GP5蛋白 原核表达 间接ELISA porcine reproductive and respiratory syndrome vir
• 基金项目: 潍坊市科技发展计划项目（2016RKX103）,山东省农业重大应用技术创新课题（规模化畜禽场清洁生产关键技术研究与示范）,山东省生猪产业体系潍坊试验站（SDAIT-06-021-12）

为建立检测感染猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒（PRRSV）或PRRSV弱毒疫苗免疫后猪群体内抗体水平的方法，本研究以PRRSV GP5基因的原核表达蛋白为包被抗原，建立了间接ELISA抗体检测方法。利用RT-PCR扩增PRRSV GP5基因，将其克隆于pGEX-6p-1中构建原核重组表达载体pGEX-6P-GP5，转入大肠杆菌BL21 （DE3）中进行诱导表达，以梯度尿素法对表达蛋白纯化后，以其为包被抗原，利用方阵试验对间接ELISA方法进行优化，最终确定了GP5蛋白的最佳包被浓度是150 ng/孔，被检血清