【摘 要】
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目的 探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2-Exo)对胶原诱导的类风湿关节炎(RA)小鼠的作用及可能机制.方法 分离提取C57BL/6J小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),收集白细胞介素-4(IL-4)诱导的M2型巨噬细胞培养的上清液,用超速离心法分离出M2-Exo.使用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察M2-Exo的形态结构及粒径分布;采用细胞免疫荧光染色及Western blotting法检测M2-Exo处理的M1型巨噬细胞的表面标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(Arg
【机 构】
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浙江省立同德医院 骨伤科,浙江 杭州 310012
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目的 探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2-Exo)对胶原诱导的类风湿关节炎(RA)小鼠的作用及可能机制.方法 分离提取C57BL/6J小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),收集白细胞介素-4(IL-4)诱导的M2型巨噬细胞培养的上清液,用超速离心法分离出M2-Exo.使用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察M2-Exo的形态结构及粒径分布;采用细胞免疫荧光染色及Western blotting法检测M2-Exo处理的M1型巨噬细胞的表面标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(Arginase)的表达.复制胶原诱导的DBA/1小鼠RA模型,随机分为模型组和M2-Exo组,以正常DBA/1小鼠为对照组.M2-Exo组在首次免疫后第16天及第26天关节腔注射M2-Exo(100μg/只),发病全过程监测关节炎病变并评分,于第42天安乐处死小鼠.对3组小鼠左后足拍照并测定厚度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠关节中促炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)和白细胞介素-6(IL-6)的表达;采用RT-PCR检测3组小鼠关节中M1型和M2型巨噬细胞的表面标志物iNOS2、CD86、Arginase、CD206 mRNA的相对表达量.结果 M2-Exo为类圆形、有完整的包膜的囊状结构,粒径均值为44.1 nm.M2-Exo处理24 h后的M1型巨噬细胞表达Arginase,不表达iNOS.在RA发病过程中,M2-Exo组小鼠平均关节炎指数(AI)低于模型组(P0.05);M2-Exo组小鼠关节IL-1β、TNF-ɑ和IL-6水平均降低(P<0.05).M2-Exo组小鼠关节组织中iNOS和CD86 mRNA的相对表达量低于模型组(P<0.05),而CD206和Arginase mRNA的相对表达量高于模型组(P<0.05).结论 M2-Exo可能通过重编程炎症M1型巨噬细胞转换为M2型抗炎的巨噬细胞,以缓解RA病情.
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