【摘 要】
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本实验比较了3种RNA提取方法提取单叶省藤的茎、雄花序和根的结果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA无明显降解、完整性好,均可用于cDNA文库构建,而异硫氰酸胍法提取的RNA降解
【机 构】
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中国林业科学研究院热带林业研究所,湖南农业大学生物科学技术学院
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本实验比较了3种RNA提取方法提取单叶省藤的茎、雄花序和根的结果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA无明显降解、完整性好,均可用于cDNA文库构建,而异硫氰酸胍法提取的RNA降解严重;考虑到改良CTAB法成本较低,故推荐为首选方法。将茎、雄花序和根三种组织的RNA等量混合后,利用SMART策略构建了全长cDNA文库;通过涂平板培养后的菌落计数,测得初库滴度为2.91×10^5cfu/μL;从培养平板上随机挑取16个菌落进行PCR检测,文库重组率为87.5%,插入片段平均长度为1.5kb左
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