【摘 要】
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采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液.提纯的病毒粒子经蛋白酶K处理和酚-氯仿抽提,在1%琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到11条dsRNA,利用柱离心式胶回收试剂盒纯
【机 构】
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中国科学院武汉病毒研究所,武汉,430071
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采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液.提纯的病毒粒子经蛋白酶K处理和酚-氯仿抽提,在1%琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到11条dsRNA,利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段.纯化的dsRNA溶于90%的DMSO中,70℃变性15min,然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的cDNA,并平头连接于pZErO 2.0载体的EcoRV位点,电转化TOP10感受态细胞.重组质粒经酶切、PCR扩增得到大小不等的插入片段,cDNA-RNA斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段.采用循环PCR测序的方法,对其插入片段进行了序列测定,对其中第11片段的部分序列作了报道.
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