【摘 要】
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目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)靶向抑制卷曲蛋白(Frizzled)受体对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)的抑制作用.方法:将针对人Frizzled受体基因设计合成的3对特异性小干扰RNA(siRNA)分
【机 构】
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泉州医学高等专科学校病理教研室,福建泉州,362000;福建医科大学附属第二医院整形外科,福建泉州,362000;福建医科大学附属第二医院皮肤科,福建泉州,362000
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目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)靶向抑制卷曲蛋白(Frizzled)受体对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)的抑制作用.方法:将针对人Frizzled受体基因设计合成的3对特异性小干扰RNA(siRNA)分别转染体外培养的人KFB,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和western blot筛选出干扰人KFB Frizzled受体基因表达的最佳siRNA,进而转染人KFB,并采用qPCR及western blot检测Frizzled受体及相关基因和蛋白表达;采用细胞增殖检测试剂(CCK)-8检测细胞增殖情况.结果:siRNA303具有最佳的Frizzled受体mRNA和蛋白质抑制效率,Frizzled受体siRNA转染后,KFB的Frizzled受体、Wnt2、糖原合酶激酶(GSK) 3β和D型细胞周期蛋白(cyclin D)1 mRNA及蛋白表达均下降.p-GSK3β蛋白表达下降,KFB生长受抑制程度增大,增殖减慢,且随着培养时间的延长,细胞倍增时间明显延迟.结论:转染靶向Frizzled受体的siRNA可有效敲低该基因在KFB内的表达,从而抑制成纤维细胞增殖.
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